新基因NOK在肺癌增殖与转移过程中的作用与机制研究

肺癌的发病率和死亡率位居所有恶性肿瘤之首。NOK基因是新近发现的一个候选癌基因，其表达与乳腺癌和肺癌相关。我们的初步研究表明，NOK与肺癌的分期、分化程度及预后密切相关。本课题通过进一步分析NOK基因表达与肺癌分期、分型、预后的关系，探讨其作为肺癌诊断与预后判定的依据，通过体外上调和阻断NOK基因的表达，分析其促进肺癌细胞增殖与转移的作用，探讨其激活的上下游信号通路，从而证实NOK基因是肺癌发生发展的重要癌基因之一，并阐明NOK基因促进肺癌增殖和转移的作用机制，这对肺癌乃至相关肿瘤的临床诊治将有重要意义。

受体型酪氨酸蛋白激酶（RPTKs）在调节细胞迁移、增殖、凋亡等一系列过程中发挥着重要作用。刘力报道了一个新的RPTK分子并命名为NOK，该分子能够诱导肿瘤的发生及转移。但NOK在非小细胞肺癌（NSCLC）发病中的作用及机制尚不明了。本课题的研究目的是探究NOK在NSCLC发生发展中的作用及其机制。.首先，用免疫组化法检测了155例非小细胞肺癌组织中NOK蛋白的表达。结果显示，NOK的阳性表达主要位于胞质内。NOK在NSCLC癌及癌旁组织中总的阳性率分别为68.39%、12.9%(p=0.000)；在鳞癌和腺癌中的阳性率分别为63.95%、73.91%(p=0.09)；高中低分化鳞癌中NOK的阳性率分别为29.03%、82.61%和88.89% (p=0.000)，高中低分化腺癌组织中NOK的阳性率分别为0.0%，68.29%和100% (p=0.000)；在肺鳞、腺癌TNM分期中也存在差异)。以上结果表明NOK在NSCLC组织中存在高表达，表达的高低与病理分级、TNM分期相关。. 接着，用电穿孔法将含NOK全长基因的重组真核表达质粒转染入肺腺癌细胞株A549及SPC-A-1中。稳定筛选出的单克隆细胞株，用RT-PCR和Western blot法进行验证。通过流式细胞术检测细胞周期、凋亡，结果显示转染后的细胞中S期细胞增多，细胞增殖指数升高，细胞凋亡比例减少；MTT法绘制细胞生长曲线，转染后的细胞较对照组细胞生长曲线上移；划痕试验、细胞Transwell迁移试验检测转染前后细胞的迁移能力，转染后的细胞迁移速度加快；Transwell迁移试验中转染后的细胞穿膜细胞数较照组增多；细胞Matrigel侵袭试验检测细胞侵袭能力，转染组的穿膜细胞数较对照组增多。以上实验证明，NOK可提高肺癌细胞增殖、迁移和侵袭的能力并抑制其凋亡，可能在肺癌的发病中发挥重要作用。. 另外，用免疫组织化学法检测了155例NSCLC患者肿瘤组织中EGFR和NOK的表达，结果显示EGFR和NOK在总的NSCLC及其组织分类的鳞癌、腺癌中表达率和阳性强度存在相关性，相关系数分别为0.742, 0.722, 0.756。激光共定位实验显示NOK和EGFR在肺癌组织和细胞中存在共定位现象。这些结果说明NOK和EGFR可能在NSCLC的发生发展中存在共同或相互协调作用。