以系列亲和色谱/指纹图谱整合技术发现生脉散防治心脑缺血性疾病活性成分群及靶标群，探讨其作用机制

In order to solve the major problem that characteristic of multicomponents, multitargets and multipathways mechanism of traditional Chinese medicine is difficult to be representated in the modern studies, we hypothesized that "The integrated mechanism of complex prescription of TCM could be eluciated by its effective components binding to functional proteins, interfering and modulating related signal pathways, and therefore improving macro indications", accoring to the thoughts of network pharmacology and translational medicine and our previous studies. In the present project, we try to establish the novel strategy to identify multicomponents and multipletargets for some certain diseasesand explore its integrated mechanism by serial affinity chromatography (SAC) method combined with HPLC Fingprint technology. We select Shengmai-san with significant curative effects on ischemic cardiovascular and cerebrovascular diseases as one object and try to representate multicomponents from Shengmai-san with HPLC Fingprint technology, and explore specific binding proteins by SAC. We try to identify specific binding components and their binding proteins from cells and tissues related to the diseases, try to select and verify major active components and key functional proteins, explore related signal pathways and molecular network, so as to eluciate the intergrated mechanism of Shengmai-san with multieffective components. Our findins will put some new insights for modern research of traditional complex prescrption of TCM and some evidences for new drug innovation with independent intellectual property rights.

针对中药复方多成分多靶点多作用途径协同整合作用特色及其在现代研究中难以表征的重大难题，本课题在多年研究基础上，借鉴网络药理学和转化医学的思路，提出"复方不同活性成分可与体内多种功能蛋白特异性结合，通过多靶点协同影响和调节相关效应通路分子网络，继而综合调整宏观指征，是其防治疾病整合作用机制之一"的研究假说，拟构建以系列亲和色谱/指纹图谱整合技术,发现中药复方防治特定疾病活性成分群及靶标群，探讨其作用机制的研究策略。本课题以防治心脑缺血性疾病疗效确切经典名方-生脉散为对象，以HPLC指纹图谱为复方多成分变化表征手段，以系列亲和色谱为特异结合蛋白发现方法，识别生脉散在疾病相关细胞组织中特异性结合的化学成分及与其结合的蛋白组，遴选和确证介导其药理活性的主要有效成分和关键功能蛋白，探讨基于多功能蛋白及相关信号通路分子网络，进而阐释生脉散多成分协同整合作用机制。为中药复方现代基础研究提供研究思路。

针对中药复方多成分多靶点多作用途径协同整合作用特色及其在现代研究中难以表征的重大难题，本课题在多年研究基础上，借鉴网络药理学和转化医学的思路，提出“复方不同活性成分可与体内多种功能蛋白特异性结合，通过多靶点协同影响和调节相关效应通路分子网络，继而综合调整宏观指征，是其防治疾病整合作用机制之一”的研究假说，构建了以系列亲和色谱/指纹图谱整合技术，发现中药复方防治特定疾病活性成分群及靶标群，探讨其作用机制的研究策略。本课题以防治心脑缺血性疾病疗效确切经典名方-生脉散为对象，在已建立的生脉散HPLC-UV，HPLC-ELSD化学指纹图谱的基础上，比较了生脉散与正常及病理模型下的靶细胞作用前后的化学指纹图谱的变化，分析和鉴定细胞裂解液的结合成分，建立了生脉散与靶细胞裂解液结合的化学成分指纹谱，识别出生脉散防治心脑缺血的主要活性成分群。进一步以生脉散主要活性成分群为探针，利用网络信息学的方法，构建了生脉散化合物群与心脑缺血疾病相关联的蛋白谱和信号通路，同时，以系列亲和色谱为特异结合蛋白发现方法，制备了以生脉散化合物群为配基的亲和色谱介质，识别其在心脑缺血疾病相关病理模型组织的相互作用蛋白，并与生脉散活性成分群相关联的心脑缺血疾病作用蛋白谱相关的信号通路进行拟合，遴选出关键功能蛋白，并采用siRNA干扰技术证明关键功能蛋白在心肌功能中的重要性；进一步通过系列亲和色谱及计算机虚拟分析分子对接等技术，分析了生脉散活性成分中各成分与信号通路中关键功能蛋白组之间的相互作用关系；最终，阐释了生脉散活性成分群通过各自调控多个关键功能蛋白，调节相关信号转导通路，改善能量代谢、炎症反应及氧化应激等多途径，从而发挥保护效应的多成分协同整合作用机制。本研究基于转化医学的研究模式，立足以临床疗效为本，以药效学为指导，综合利用药理学、分子生物学、系列亲和色谱、生物信息学等多学科交叉技术方法，从细胞、分子、信号转导通路、整体效应等多层次多途径，探索发现了生脉散多成分防治心脑缺血性疾病的分子机制，为进一步揭示该方防治相关疾病的作用特色与信号途径，指导其临床更合理应用提供参考依据，同时，为中药现代化科学研究提供了范例，为中药复方现代基础研究提供了新的研究思路和方法学。.综上，经过三年的努力，已全面完成课题的预定目标，共发表论文21篇，其中15篇为SCI收载，培养研究生14名，其中博士4名，硕士10名。