miRNA促进乳腺微环境成纤维细胞向CAF转化及机理研究

肿瘤相关成纤维细胞（CAFs）是肿瘤微环境的最主要成员，参与肿瘤发生、转移、血管形成等过程。这提示研究CAFs对了解肿瘤发生、发展，寻找综合治疗策略具重要价值。CAFs的活化是关系到CAFs功能的重要环节；明确CAFs的活化机理，是抑制CAFs活性与功能的根本。成纤维细胞向CAFs转化的本质系细胞逆分化，因此，本项目提出调控细胞分化的miRNA，可能在乳腺癌CAFs的活化中起关键作用。我们采用miRNA-array筛查与CAFs活化相关的miRNA。为证实关键miRNA在CAFs活化中的意义，和对CAFs的功能影响，将下调的关键miRNA导入CAFs，或使上调的关键miRNA在CAFs沉默表达，研究关键miRNA对CAFs的活化、靶基因的调控、癌细胞增殖、肿瘤形成、迁移等的影响。研究结果将有助于揭示miRNAs对乳腺肿瘤CAFs的活化，并为针对CAF的乳腺癌综合治疗，提供潜在的靶向目标。

经过三年辛勤努力，优质地完成了本研究课题，达到预定目标。主要成果如下：1.从乳腺肿瘤组织中原代分离培养正常成纤维细胞(NF)、肿瘤相关成纤维细胞(CAF),用miRNAs芯片技术，首次获得与CAF功能、活化有关的miRNAs 11个：上调miRNA 3个（miR-221-5p, miR-31-3p, miR-221-3p），下调miRNA 8个（miR-205, miR-200b, miR-200c, miR-141, miR-101, miR-342-3p, let-7g, miR-26b）。2. 通过生物信息手段，获得受miRNA调控的潜在靶基因，并与mRNA芯片数据比较，找到关键miRNA有关的靶基因；通过GO分析，Pathway聚集分析，获得受miRNAs调控的CAF生物功能及可能的靶信号；发现IL-6，HGF，TGF-beta，chemokine signaling，insulin，MAPK signaling，tight junction，adherence junction，EGF，androgen-receptor signaling，Wnt 和 IL-7 signaling信号参与了CAF活化并影响CAF分化、增殖、粘附、运动等生物行为。3. 研究发现CAF中c-Ski的高表达与乳癌的进展密切相关，随乳腺肿瘤的进展而逐步增高，并与病人的预后明显正相关。NF中外源性上调c-Ski表达，或敲低CAF中内源性c-Ski表达，CAF标志蛋白alpha-SMA、FAP等明显上调或下调，即c-Ski表达直接影响CAF活化。我们首次证实c-Ski通过抑制p53，上调SDF表达,激活TGF-beta信号，参与CAF活化，并促进乳癌细胞的转移。本项目，共发表有关研究论文8篇，其中SCI收录论文3篇，最高IF 6.7. 共培养4名研究生，其中博士1名。