Beclin-1基因表达对胃癌细胞化疗敏感性影响的研究

Beclin1 基因是一种双等位抑癌基因，Apg6同源基因，为细胞自噬的调控基因，与恶性肿瘤发生、发展、化疗敏感性有关。本课题研究新辅助化疗的临床效果与Beclin1基因和蛋白表达的关系，确定化疗敏感性的分子生物学指标。体外实验：通过RT-PCR，酶切鉴定及DNA测序证实成功构建质粒 pcDNA3.l(+)/Beclin1载体，导入胃癌SGC7901/DDP耐药细胞株，检测重组质粒PcDNA3.1（+）/Beclin1导入前后的细胞株对DDP化疗敏感性和Beclin1和Bcl-2基因和蛋白的表达、细胞自噬和凋亡的变化。用导入前后的胃癌细胞株，分别建立裸鼠胃癌皮下和原位移植模型。用5-FU+DDP静脉化疗，研究体外导入Beclin基因到胃癌耐药SGC7901/DDP细胞株，改变Beclin1基因表达，对体内成瘤化疗敏感性变化和生物学特性影响，为开发启动自噬途径的靶向治疗肿瘤药物奠定实验基础。

摘要：自噬对于肿瘤是把双刃剑。在肿瘤发展期间，自噬对于肿瘤起到保护性作用。在本研究中我们发现：（1）自噬基因Beclin-1在胃癌组织和细胞中处于一个高表达状况，且Beclin-1基因高表达病人预后较差；（2）同时，我们还发现乳酸脱氢酶(LDH)在胃癌组织和细胞中也处于一个高表达状态，但在正常胃粘膜组织及细胞中表达明显降低，且高表达病人预后同样较差；（3）应用乳酸脱氢酶特异性抑制剂草氨酸钠对肿瘤细胞有明显的的增殖抑制、凋亡诱导作用，而对正常的胃粘膜细胞却影响不大；在抑制肿瘤细胞自噬后，草氨酸钠对肿瘤细胞的抑制作用更加明显，同样，对于正常胃粘膜细胞却影响不大；（4）草氨酸钠引发胃癌肿瘤细胞自噬的机制为诱导活性氧（ROS）的上调及自噬的上调；（5）草氨酸钠诱导自噬的通路为抑制AKT-mTOR通路的上调诱发。上述结果显示，在抑制肿瘤细胞的自噬情况下抑制肿瘤细胞的糖酵解，能够为胃癌的治疗提供一个新的方向。