SPHK1/S1P/S1PR1信号轴介导NLRP3炎症小体在口腔扁平苔藓中的致病机理研究

Oral lichen planus (OLP) is a T cell-mediated chronic inflammatory disease of the oral mucosa with unclear pathogenesis. In our preliminary study, NLRP3 inflammasome and its activation product, sphingosine kinase 1 (SPHK1) and sphingosine 1-phosphate receptor 1 (S1PR1) were found to be highly expressed in OLP tissues. What’s more, activation of NLRP3 inflammasome in macrophages and oral keratinocytes induced the expression of SPHK1 and S1PR1. Considering the crucial functions of NLRP3 inflammasome and sphingosine 1-phosphate (S1P) in inflammation, we infer that the SPHK1/S1P/S1PR1 axis may mediate the pathological effect of NLRP3 inflammasome in OLP. To address the hypothesis, the expression of related molecules of NLRP3 inflammasome and SPHK1/S1P/S1PR1 signal axis in OLP patients will be determined, and the correlation between the expression and OLP clinical parameters will also be analyzed. Moreover, the effects and related regulatory mechanisms of NLRP3 inflammasome on oral keratinocytes, dendritic cells, macrophages and T cells via modulating the SPHK1/S1P/S1PR1 axis will be comprehensively explored to reveal the infiltration and activation of T cells and apoptosis or abnormal differentiation of keratinocytes in OLP lesions. The project may provide important theoretical and experimental basis for the pathogenesis research and new therapy of OLP.

口腔扁平苔藓（OLP）是T细胞介导的口腔黏膜慢性炎症性疾病，其发病机理未明。项目前期研究发现，OLP组织高表达NLRP3炎症小体及其活化产物、鞘氨醇激酶1（SPHK1）和鞘氨醇-1-磷酸受体1（S1PR1）；巨噬细胞（Mφ）及口腔角质形成细胞（KC）中NLRP3炎症小体激活可诱导SPHK1及S1PR1表达。基于NLRP3炎症小体和鞘氨醇-1-磷酸（S1P）在炎症反应中的重要作用，我们首次提出假设：SPHK1/S1P/S1PR1信号轴介导NLRP3炎症小体在OLP中的致病作用。为此，本项目拟系统分析NLRP3炎症小体及该信号轴相关分子的表达与OLP的临床相关性，并探讨NLRP3炎症小体通过该信号轴对口腔KC、DC、Mφ和T细胞的作用及相关分子调控机制，以揭示OLP病损中T细胞浸润和活化及KC凋亡或异常分化的原因。本项目将为OLP的致病机理研究和新治疗方案的探索提供重要的理论和实验依据。

口腔扁平苔藓（OLP）是T细胞介导的口腔黏膜慢性炎症性疾病，其发病机理未明。本项目通过对临床组织标本、细胞的系统研究：①阐明了SPHK/S1P/S1PRs信号通路与OLP的临床相关性。与正常口腔黏膜组织相比，OLP患者组织中NLRP3炎症小体及下游IL1β活化，且NLRP3的表达与OLP进展程度和分型相关；qPCR结果显示，与正常口腔黏膜组织相比，OLP患者组织中NLRP3炎症小体及下游IL1β转录活化；SPHK/S1P/S1PRs信号轴中SPHK1、SPHK2、S1PR1、S1PR4、S1PR5的mRNA表达显著上调，其中以SPHK1及S1PR4、S1PR5上调最为明显，提示SPHK1/S1P/S1PR4&5信号轴可能在OLP中发挥致病作用。②OLP患者免疫状态及功能改变。虽然 OLP 的具体发病机理不清楚，但目前多数学者认为自身反应性 T 细胞浸润和活化是造成 OLP 病理损伤的重要原因，流式结果显示OLP患者血液中CD3+CD4+T细胞含量下降，NK细胞含量上升，OLP患者血清中IL-1β、IL-6、IL-8、IL-10及TNF-α水平上升。然而OLP组织标本中，IHC结果CD3蛋白表达升高，可能OLP口腔局部免疫微环境发生了改变。③初步发现SPHKs 及 S1PRs 的表达和分布格局或可影响OLP组织免疫细胞的表型和功能。IHC结果表明OLP组织NLRP3蛋白表达高于正常口腔粘膜组织，提示NLRP3炎症小体活化；OLP上皮层SPHK1、SPHK2、S1PR4、S1PR5表达下降，可见SPHK1、SPHK2、S1PR4、S1PR5聚集于免疫浸润层，并与CD4+T细胞的分布具有明显的一致性，④初步阐述了抑制SPHK/S1P/S1PRs 可以影响口腔上皮细胞的生长及功能。OLP细胞中S1PR4/5的表达明显高于正常永生化口腔上皮细胞，抑制S1PR4/5可抑制OLP细胞的细胞活力及细胞因子分泌。本项目从组织、细胞及分子水平多层次探讨 NLRP3 炎症小体通过影响 SPHK/S1P/S1PRs 信号轴在 OLP 中发挥致病作用的具体机制，以揭示 OLP 病损中 T 细胞浸润和活化及 KC 凋亡或异常分化的原因，为 OLP 的致病机理研究提供理论和实验依据，最终为 OLP 的治疗提供新策略和新靶标。