lncRNA参与miR-181调控重症肌无力免疫细胞分化的机制研究

Many report data show that microRNA (miRNA) and lncRNA (long non-coding RNA) play an important role in immune cells (T cell and B cell) differentiation.and they may play an important role in the autoimmune disease development. Our previous studies have confirmed that the expression of miR-181 was lower in myasthenia gravis(MG). In this study, we will explain how miR-181 regulate the lymphocyte differentiation during the myasthenia gravis pathogenesis. On the basis of the lncRNA chip result and the theory of lncRNA regulating gene transcription, we will bring the concept of ceRNA in the mechanism of lncRNA regulating miR-181 in myasthenia gravis. Then, we will clarify the mechanism of miR-181 in lymphocyte differentiation and the reasons of the miR-181 expression maybe regulate by the abnormal LncRNA reveals in myasthenia gravis. Futhermore we will illuminate lncRNA not only regulate miR-181 precursor expression, but also play as a ceRNA role competitively combined to miR-181, affecting the immune cell differentiation through the miR-181. These will provide theoretical and experimental basis for verifying the mechanism of myasthenia gravis and identifying biomarker for the early diagnosis and prognosis in myasthenia gravis.

文献研究显示microRNA（miRNA）和lncRNA(long non-coding RNA)在调控免疫细胞（T细胞和B细胞）的分化及疾病的发生发展研究中发挥重要作用。我们前期研究结果显示miR-181在重症肌无力中表达下调。本项目通过lncRNA芯片结果，结合lncRNA可以调控基因转录水平表达理论，同时将lncRNA的ceRNA的概念引入到miR-181在重症肌无力调控机制中，明确miR-181 在重症肌无力中对淋巴细胞的分化的调控作用；揭示lncRNA的异常表达是miR-181在重症肌无力达下调的原因之一。进一步阐明lncRNA既可调控miR-181 的前体的表达，同时也作为ceRNA竞争性结合miR-181，通过miR-181影响免疫细胞的分化机制研究。为重症肌无力的发生发展机制、诊断分子标志物的筛选以及临床治疗提供理论基础和实验依据。

重症肌无力是神经肌肉接头相关疾病中最常见的自身免疫性疾病。但是非编RNA的研究甚少，因此我们通过目通过结合前期lncRNA芯片结果，采用荧光素酶报告载体系统、流式细胞分析等技术进行系统研究。.研究发现，MG患者lnc-CXCL1及IFNG-AS表达明显下降；激素治疗有效组中，lnc-CXCL1及IFNG-AS的表达治疗后明显比治疗前升高；lnc-CXCL1的表达与MG患者临床症状QMG评分呈负相关，而与AchR-Ab浓度之间却不存在明显的相关性。IFNG-AS具有相类似的结果。.通过荧光素酶报告基因实验证实Lnc-CXCL1和IFNG-AS与miR-181a存在结合位点，其表达受其调控。在Jurkat T细胞中，miR-181a能够下调lnc-CXCL1、IFNG-AS的表达，干扰miR-181a后则上调lnc-CXCL1、IFNG-AS的表达。同时miR-181a对IL-2的表达存在类似表达调控；lnc-CXCL1上调IL-2的表达，同时干扰miR-181a后，lnc-CXCL1对IL-2的表达调控作用消失、IFNG-AS存在相类似的结果。与对照组相比，lnc-CXCL1和miR-181a组可以降低CD4+T的活性，同时lnc-CXCL1、miR-181a组均可降低th1相关转录因子T-bet以及CD4+T细胞分泌的IFN-γ的表达。.Lnc-CXCL1、IFNG-AS和miR-181a治疗能够减轻EAMG的临床症状评分。miR-181a能降低了th1和th17的比例，上升treg比例；Lnc-CXCL1能降低了th1和th17比例；IFNG-AS能降低th1的比例，上调treg比例，同时他们分别对其相应的细胞转录因子具有调控作用。Lnc-CXCL1、IFNG-AS及miR-181a治疗组治疗后抗T-AchR抗体IgG较对照组明显下降，其亚型IgGb2的水平亦较对照组明显下降。.该项目研究明确lnc-CXCL1等在重症肌无力中对淋巴细胞的分化的调控作用；揭示lnc-CXCL1、IFNG-AS的异常表达是miR-181在重症肌无力达下调的原因之一。进一步阐明lnc-CXCL1、IFNG-AS作为ceRNA竞争性结合miR-181，影响免疫细胞的分化机制研究。为重症肌无力的发生发展机制、诊断分子标志物的筛选以及临床治疗提供理论基础和实验依据。