MiR-375 对HPV16/18癌基因E6/E7的调控作用及其机制

High risk human papillomavirus (HR-HPV) oncogenes E6/E7 constant overexpression is the key step to initiation and progression of cervical cancer. However, the mechanism of E6/E7 high expression is still unclear. The important role of microRNAs (miRNAs) in regulation of genes provides us a new idea in exploring the regulation mechanism of E6/E7. Our current experiment have showed miR-375 expression levels were inversely correlated with HPV16/18 E6 and E7 levels in both precancerous lesions and cervical cancer tissues, and overexpression of miR-375 could inhibited the expression of E6 and E7 in cervical cancerl cell lines. Thus, in this study, we explored the significance and molecular mechnisms of miR-375 in regulating the expression of HR-HPV oncogenes E6/E7 from different levels of molecules, cells, sufficient series of well-defined clinical specimens, and animal models, designed to rich HPV carcinogenic theory and reveal body's defense mechanism, and suggest miR-375 might be an anticancer therapeutic target for cervical cancer patients.

高危人乳头瘤病毒（HR-HPV）癌基因E6/E7持续过度表达是宫颈癌发病与进展的关键环节，但迄今对E6/E7高表达的原因及机制仍不确定。miRNA在基因调控中的重要作用为我们探索E6/E7调控机制带来新的启迪。我们初步研究发现，在宫颈癌及其前期病变中miR-375与HPV 16/18 E6/E7表达呈负相关，过表达宫颈癌细胞中miR-375可引起E6/E7表达下调，表明miR-375可能参与E6/E7的表达调控。本课题拟从miRNA调控病毒关键基因表达的全新视角，从分子、细胞、组织标本及动物实验多个层次验证，并寻找miR-375调控这一生物学行为的关键靶体，探讨miR-375在HPV持续感染，HPV整合及致病过程中的重要作用，旨在揭示宫颈癌高危HPV病毒癌基因表达的分子调控机制及机体的防御机制，为寻找阻断宫颈癌发生的新靶点提供证据。

高危人乳头瘤病毒是宫颈癌的主要致病病因，病毒致癌机制始终是研究的热点。该研究尝试从miRNA的角度探讨病毒调控的机制。研究发现miR-375的表达水平与E6 mRNA、E7 mRNA水平均呈显著负相关，同时miR-375的过表达不仅下调E6/E7，同时可以特异性的通过E6/E7调控宿主p53、MCM7等重要的信号通路分子。进一步探讨miR-375与HPV16感染物理状态的关系过程中，发现在宫颈癌组织中miR-375表达下调，而HPV16也有游离曲线整合，提示miR-375表达与HPV16感染物理状态的相关性，但进一步的机制还有待更深入的探索。 miR-375过表达引起 E6/E7mRNA不同转录剪切本的表达水平均减低，但各个不同的剪接子的相对比例构成变化不显著，提示miR-375过表达引起E6/E7表达水平改变可能与剪切过程无关。通过蛋白芯片技术、Oncomine数据库比对数据库中的宫颈癌数据集中的表达情况，通过Targetscan、miRTarBas、miRanda等预测软件预测miR-375靶基因进行生物信息学分析，筛选出UBE3A和JunD两个分子，并对其与miR-375的相互作用进行深入研究。研究发现：miR-375通过调控UBE3A和JunD分子影响细胞的生物学行为特征，miR-375通过作用于JunD调控了病毒E6/E7的表达，而JunD的表达水平与临床不良参数显著相关。MiR-375作为一个重要的分子标志物，进一步探索而在宫颈脱落细胞筛查诊断研究中，发现miR-375具有持平甚至超越TCT筛查的灵敏性和特异性的优势，使得miR-375成为具有潜在用于临床宫颈癌筛查分流的重要价值。因此miR-375的全面深入研究，尤其是与病毒相关性的研究不仅可以丰富病毒致癌的机制，完善病毒致癌的理论，为寻找新的治疗方法提供新的潜在靶点，也为宫颈癌筛查预防寻找新的技术和方法提供研究基础和依据，有助于提高早期诊断率，提高早期治愈率，保护女性生殖健康，具有重要意义。