microRNA-10a在平滑肌细胞表型转换中的作用机制研究

平滑肌细胞（SMC）异常增生及表型转换是心血管疾病的重要致病机理，microRNA介导的转录后调控网络在SMC表型转换中发挥着重要作用。通过自创的SMC体外分化系统我们首次发现miR-10a参与SMC分化过程，前期数据显示miR-10a能够显著抑制血管损伤过程中新生内膜的形成。为了阐明miR-10a参与体内SMC表型转换及抑制血管新生内膜形成的调控机制,本申请拟利用SMMHC-miR-10a转基因小鼠为材料，通过先进的SILAC蛋白质组学技术筛选并鉴定miR-10a靶基因。经定点突变、双荧光素酶报告系统分析、体外过表达等分子细胞生物学方法验证miR-10a与靶基因的相互作用关系，结合体外胚胎干细胞分化模型及体内金属丝股动脉损伤模型揭示miR-10a及其靶基因在SMC表型转换中的作用，为microRNA在心血管疾病的临床应用提供重要依据和药物开发的靶点。

血管平滑肌细胞(VSMC)的去分化及表型转换是心血管疾病的重要致病机理。microRNA介导的转录后调控网络在SMC的发育、分化及表型转换中发挥着重要作用。我们以前的研究报道miR-10a参与SMC的分化并能显著抑制血管损伤过程中新生内膜的形成。本项目的关键目标就是揭示miR-10a在这一生物学过程中的分子机制。通过稳定同位素标记（SILAC）蛋白质组学技术，我们发现在过表达miR-10a小鼠血管组织中有253种蛋白质表达与WT组织存在显著差异，其中有152种蛋白表达下调，101种蛋白表达上升。对这些差异表达基因进行生物信息学分析后，显示它们大多参与SMC分化、繁殖和迁移等生物过程。p53在过表达mir-10a转基因小鼠血管组织中表达上调，表明p53并非miR-10a的靶基因，是其间接调控的结果。有趣的是，在体外ESC-SMC 分化诱导过程中，我们也发现了p53 促进SMC分化的关键证据。进一步通过Chip、EMSA 和点突变等分子生物学实验鉴定出了p53 参与SMC 表型变换的下游靶基因Myocardin。最后我们采用ESC-SMC 分化的细胞模型及SMMHC-p53过表达小鼠动物模型，结合血管损伤动物实验，我们发现这样一个调控途径：RA能够促进miR-10a的表达，后者通过间接调控的方式增强p53基因的表达，p53作为转录因子直接与SMC的关键基因Myocardin的启动子结合促进其转录，从而促进平滑肌细胞的发育及体外分化。同时增强Myocardin的表达也能够抑制体内SMC的表型转换及病变血管新生内膜的形成。本项目结果可为miR-10a和p53的基因治疗及相关抗肿瘤药物在心血管疾病的临床应用提供重要参考。