多级肿瘤靶向纳米载体的抗肿瘤作用及其机制研究

我们前期筛选出一种靶向p230（特异表达于人肝癌细胞表面的抗原）的免疫毒素SM5-1-PE38KDEL突变体1 (Mut I)，Mut I既保留了SM5-1-PE38KDEL的抗肿瘤活性，而且其非特异毒性也显著降低，然而Mut I的免疫原性仍有待克服。我们拟用PLGA-PEG-COOH（聚乳酸－聚乙醇胺－聚乙二醇）纳米材料包裹Mut I制成纳米载体，然后将靶向性抗体SM5-1的Fab'片段连接在纳米载体的表面制备成为靶向纳米载体。在本课题中我们将对这种靶向纳米载体的各种纳米表征、体内外靶向性、药代动力学和抗肿瘤作用及机制进行研究。这种靶向纳米载体预期在体内外具有多重特异性靶向并杀伤肝癌细胞的能力，而且半衰期较长，免疫原性小，能反复多次应用，且无明显肝毒性，血管渗漏综合症等毒副作用，其抗肝癌机制在课题中将同时被探讨。该课题的开展将可能为靶向纳米载体治疗肝癌提供新的方法。

肝癌是严重威胁人类健康的肿瘤之一。纳米药物为肝癌治疗带来了新的希望。在本研究中，我们制备一种靶向p230（特异表达于人肝癌细胞表面的抗原）的免疫毒素SM5-1-PE38KDEL突变体1 (Mut I)，Mut I既保留了SM5-1-PE38KDEL的抗肿瘤活性，而且其非特异毒性也显著降低，然而Mut I的免疫原性仍有待克服。我们利用PLGA-PEG-COOH（聚乳酸－聚乙醇胺－聚乙二醇）纳米材料包裹Mut I制成纳米载体，然后将靶向性抗体SM5-1的Fab’片段连接在纳米载体的表面制备成为靶向纳米载体（Mut I-NP-S）。在本课题中我们对Mut I-NP-S的各种纳米表征、体内外靶向性、免疫原型，毒副作用和抗肿瘤作用及机制进行研究。结果显示：Mut I-NP-S的粒径为100 nm左右，粒径分布比较狭窄。对于p230高表达的Ch-hep-3细胞来说，Mut I-NP-S的亲和力大大高于Mut I的亲和力。而且体外细胞毒性试验显示Mut I-NP-S对于p230高表达的Ch-hep-3细胞具有特异性的杀伤能力，而对于p230低表达的QGY7701细胞的杀伤能力较弱。Mut I-NP-S免疫原性较Mut I弱，而且在含抗Mut I抗体的中和性血清中，Mut I-NP-S仍然能发挥良好的细胞杀伤能力，肝毒性和血管渗漏综合症(VLS)实验显示：Mut I-NP-S可以减轻Mut I诱发的VLS症状和肝毒性。在小鼠抗肿瘤实验中，我们发现和PBS，Mut I，Mut I-NP-anti-CD25各组比较起来，Mut I-NP-S组的肿瘤体积明显减小。这些数据显示了Mut I-NP-S是一种良好的抗肿瘤纳米药物，将有可能在肝癌治疗中发挥重要作用。. 该课题按照原定研究计划顺利进行，目前申请人已将大部分结果整理成文，其中以第一作者在SCI收录的国际杂志上已发表论著5篇（均为5分以上），一篇即将投出。同时培养硕士研究生一名。