TLR-4介导的炎症反应在脂肪栓塞综合征中的作用

脂肪栓塞综合征（FES)发病凶险，死亡率高。机械堵塞和生化损伤是FES的致病机制，但生化损伤的具体途径尚不明确。我们以往的研究显示大鼠FES时体内炎性因子升高、肺组织髓过氧化酶活性增加并伴随肺组织钟样受体4（TLR4）表达增加。TLR4信号系统是内毒素激活炎症反应的途径，而脂肪酸是内毒素的活性中心。去除脂肪酸，内毒素就会完全失去毒性。因此我们假设FES时的生化损伤是(或部分是)通过TLR4介导的全身炎症反应而产生的。本研究:⑴用TLR4的小分子干扰RNA片段转染培养的大鼠肺微血管内皮细胞，观察降低血管内皮细胞TLR4的表达能否减轻混合游离脂肪酸对血管内皮的损伤；⑵在FES大鼠模型中观察用抗TLR4抗体封闭TLR4后能否减少死亡率和组织损伤。本课题旨在明确TLR4途径介导的炎症反应在FES生化损伤中的作用，从而为FES的治疗提供新的思路。

一、项目一般情况及目前完成情况：. 本课题通过在动物和细胞水平上建立的脂肪栓塞综合征生化损伤模型，研究TLR4介导的信号转导途径在其发病机制中的作用和对预后的影响。现已完成课题原设计的所有实验内容（除免疫细胞化学法观察TLR4、IKKβ在不同处理组的表达）。在实施原实验计划的小鼠肺组织冰冻切片免疫荧光法定位及定量各实验组TLR4和NF-κB (p65 subunit)表达时，经过近一年努力仍无法得到满意质量图像后，最终略去该部分实验，增加了上述细胞组化实验。目前该部分实验已大部分完成，结果即将获取。.二、目前取得成果：.（1）建立稳定的细胞和动物脂肪栓塞综合征生化损伤模型。.（2）同时在细胞和动物层面，蛋白质和基因水平均证明TLR4在脂肪栓塞综合征病理模型中表达增多，且在一定范围内与脂肪栓塞炎症损伤的程度与时间有相关性。.（3）证实脂肪酸可以激活TLR4引导的生化损伤，且与LPS激活TLR4引发机体损伤的病理过程不完全一致。.（4）发现TLR4下游信号转导分子IKKβ和NF-κB与TLR4的表达变化基本一致，证明上述信号转导途径参与脂肪栓塞综合征病理过程。.（5）在细胞和动物体内阻滞TLR4基因表达，进一步验证TLR4可引发脂肪栓塞时机体的生化损伤。.（6）探讨了TLR4引导的生化损伤对脂肪栓塞综合征预后的影响，充分指明TLR4的生化损伤作用。.（7）在本课题资助下共培养了3名硕士研究生(一名在读），现已在SCI期刊发表英文论著1篇，中文核心刊物发表文献1篇；接受待发表2篇中文核心期刊；在投一篇英文文献投向SCI收录期刊和两篇投向中文核心期刊。