靶向纳米阳离子脂质体的抗肝癌作用及其机制研究

目前研究认为骨桥蛋白(OPN)在肿瘤转移过程中发挥着重要作用。我们的前期研究结果发现，肝癌组织中OPN的表达水平显著增加与肝癌的侵袭和转移有明显的关联，用RNA干扰的方法下调OPN的表达可促进肝癌细胞凋亡及对化疗药物的敏感性，从而抑制肝癌细胞的生长。结果提示OPN可能作为肝癌治疗的新靶点用于肝癌的生物治疗。在本课题中，我们将利用阳离子脂质体包裹针对OPN的发卡RNA（shRNA,可翻译出针对OPN的siRNA），然后将本单位自主筛选的、肝癌特异性的人源化单克隆抗体Anti-p230的Fab'连接于阳离子脂质体制备成为肝癌靶向性的阳离子脂质体，从而为肝癌的基因治疗提供了一种高效、低毒、安全的非病毒型转染系统。这种靶向性阳离子脂质体可以靶向表达特异性抗原的细胞或组织，抑制肝癌细胞内OPN的表达，促进肝癌细胞的凋亡，抑制其生长和转移，达到肝癌基因治疗的目的。

我们的课题目标是获得一个高效、低毒、安全的非病毒转染系统用于肝细胞肝癌的生物治疗。.脂质体—多聚阳离子—DNA复合物（LPD）作为一种用于siRNA运送的有效的非病毒转染系统，已有详细研究。但制备靶向LPD（TLPD）的研究很少。我们利用自包装技术并连接抗EGFR抗体制备成功了TLPD。我们研究了抗体形式、交联方式及交联量对TLPD性质的影响。我们获得了一种粒径150nm，且稳定性好的粒子，命名为TLPD-FCC。与非靶向对照相比，TLPD-FCC在体外实验中显示了与阳性肿瘤细胞良好的亲和力及对荧光素酶基因的强干扰活性，共聚焦显微镜证实了其增强的吞噬能力。体内实验也证实TLPD-FCC能降低肿瘤细胞中荧光素酶活性的20%以上，而对照基本无效。.尽管TLPD-FCC在乳腺癌肿瘤中显示了良好的基因干扰活性，但在肝癌中的效果却不佳。我们对该转染系统进行了进一步的优化，调整了抗体结合率、降低了PEG化程度，获得了在肝癌细胞中具有高效运送、增强的干扰能力的优化脂质体——TLPD-FP75。组织分布实验显示在阳性肝癌细胞荷瘤小鼠中，与非靶向对照相比，TLPD-FP75具有很高的肿瘤组织富集倾向，具有强烈的基因干扰沉默活性，具备了增强肝癌基因治疗疗效的潜能。.基于以上实验，我们利用LPD包裹OPN（肝癌相关基因）发卡RNA（shRNA），外连人源化肝癌特异性抗体anti-p230，制备了肝癌基因治疗的靶向载体。该阳离子脂质体载体能将shRNA运送至肿瘤组织内部并使之表达。表达产物诱导肿瘤细胞凋亡，并抑制致肿瘤生长及转移。该非病毒转染体系显示出高效、低毒和安全的特性，通过该研究，我们获得一个新的肝癌生物治疗新策略。.通过该研究，我们共发表SCI论文5篇，其中3篇为研究论文，另2篇为首邀撰写的述评。一名硕士研究生在研究期间获得了其硕士学位。