淫羊藿总黄酮经BMP7通路调节棕/白色脂肪比例影响ApoE基因敲除小鼠动脉粥样硬化病理环境的实验研究

White adipose tissue(WAT) can secret cytokines like resistin to accelerate atherosclerosis pathological circumstance by affecting lipid metabolism and insulin sensitivity, ect. Brown adipose tissue(BAT) can reverse WAT effect as an target of anti-atherosclerosis. Bone morphogenetic protein(BMP7) is a protein which can regulate BAT/ WAT ratio.It is reported that TFE may up-regulate BMP7 level in rat thighbone, but whether it can be effective in BAT cell differentiation has not been confirmed. Therefore, we intend to observe the effect oftotal flavones of Epimedium( TFE )in BAT primary cell differentiation, testifying the up-regulation mechanism on BMP7 and PRDM16(the downstream regulating protein). On the other hand, we plan to observe the effect of TFE on ApoE knocked mice by testing BAT/ WAT proportion, serum lipid, leptin,resistin, blood glucose, aortic stenosis rate, BMP7 level in BAT, UCP-1mRNA of BATand resistin mRNA in WAT, which can supply the evidence for clinical popularization.

白色脂肪（WAT）分泌抵抗素等细胞因子影响血糖及脂质代谢等动脉粥样硬化（AS）病理环境。棕色脂肪（BAT）能够拮抗白色脂肪，因此调节棕/白色脂肪比例是潜在的抗AS靶点，但研究较少。骨形态发生蛋白7(BMP7)是棕色脂肪细胞定向分化的上游调控蛋白，同时我们观察到文献研究表明淫羊藿可上调大鼠股骨及肾脏BMP7表达；然而目前是否有中药能够经BMP7通路在棕色脂肪分化中产生作用尚未明确。 本研究拟补肾培元之法运用淫羊藿总黄酮（TFE），体外实验中观察其对棕色脂肪原代细胞定向分化的影响，验证经上游调控蛋白BMP7上调PRDM16（下游分化关键分子）及相关因子表达的机制通路；体内实验中观察其对AS模型ApoE基因敲除小鼠棕/白色脂肪比例、血脂、瘦素、抵抗素、血糖、主动脉狭窄率、BAT中BMP7水平、BAT标志物UCP-1及WAT抵抗素mRNA表达，验证其改善AS病理环境的作用和机制，提供临床推广依据。

动脉粥样硬化（AS）导致心脑血管事件的致死率与致残率逐年上升，其中肥胖被公认为是动脉粥样硬化的独立危险因子。棕色脂肪（BAT）为近年发现，可拮抗白色脂肪，通过非颤抖性产热消耗能量。BAT 与多种激素及调节因子相关，其在体内表达的上调能够减少白色脂肪从而减轻肥胖、降低血脂、降低动脉粥样硬化风险。因此，调节棕色/白色脂肪比例是整体改善动脉粥样硬化（AS）病理环境达到治疗效果的潜在而新兴的靶点。 . 祖国医学对BAT其并无特定论述，目前亦尚缺乏公认的对其系统论治的中医理论。本研究以“命门之火”理论论治棕色脂肪调节为创新性切入点，观察补肾培元代表中药淫羊藿主要成分对棕色脂肪分化的影响和机制及其对动脉粥样硬化病理环境的影响。. 本研究结果表明，淫羊藿主要成分上调棕色脂肪原代细胞上游调控蛋白 BMP7mRNA表达 ，同时上调 PRDM16mRNA表达（下游分化关键分子），增加棕色脂肪特异性标志物UCP-1mRNA表达；但对调控因子PGC-1α影响不大。证实其可上调影响棕色脂肪细胞定向分化，其机制通路可能与经BMP7调节PRDM16分化开关有关；同时发现较小剂量呈促进增殖作用，大剂量呈抑制作用。动物实验中观察到淫羊藿主要成分增加动脉粥样硬化模型 ApoE基因敲除小鼠棕色脂肪重量、棕/白色脂肪比例，降低内脏白色脂肪重量；降低血清甘油三酯水平、提高血清脂联素水平；增加棕色脂肪 BMP7免疫组化阳性表达面积，上调棕色脂肪标志物 UCP-1 mRNA ，降低白色脂肪抵抗素 mRNA 表达；增加白色脂肪UCP-1 mRNA 表达，提示其还具有改善动脉粥样硬化病理环境、促进白色脂肪棕色化作用。. 综上所述，研究结果验证阐述了从命门之火论治棕色脂肪调节及白色脂肪棕色化的有效性及作用机制。补肾培元法代表中药淫羊藿上调产热功能蛋白，同时可使白色脂肪棕色化，与命门之火的部分功能相合；其作用剂量及时间一定程度阐释了内经“少火生气，壮火食气”的内涵。另一方面，验证了其对动脉粥样硬化病理环境的改善作用。本研究对调节棕色脂肪的中医药系统论治运用提供了一定理论指导和实验依据。