Th1细胞因子基因转染增强CTL活性及机制研究

我们已证实了以改良的腺相关病毒-2型（AAV）为载体，将肿瘤抗原基因转染树突状细胞（DC），在体外可快速诱导出具有良好活性的CTL。而CTL与Th1细胞因子在抗肿瘤免疫中关系密切，因此，联合Th1细胞因子转染增强CTL活性及其作用机制是目前研究的热点。预试验证实，进一步将AAV/ IL-7转染T细胞的自分泌作用在增强CTL活性方面优于转染DC的旁分泌作用。.因此，项目拟在基因转染制备CTL基础上，选择IL-7和IL-12为代表，率先以AAV转染技术以及FACS、RT-qPCR等方法，探讨Th1细胞因子基因转染进一步增强CTL活性和调控转染基因的方法，以及明确细胞因子基因转染增强CTL活性的作用方式和可能机制。.项目为开展以AAV为载体，介导肿瘤抗原基因联合Th1细胞因子基因转染DC或T细胞，制备超强活性CTL用于肿瘤过继免疫治疗奠定基础。也为研究其他Th1细胞因子作用方式及机制提供平台。

通过树突状细胞(DC)制备细胞毒性T淋巴细胞(CTL)的过继免疫治疗有望成为肿瘤治疗新方法。如何制备良好生物活性的CTL一直是研究的热点。我们以改良的腺相关病毒-2型(AAV-2)为载体，成功制备高滴度的重组腺相关病毒rAAV/CEA、rAAV/IL-7、rAAV/IL-12，在将携带CEA基因的rAAV/CEA转染DC制备CTL，诱导特异细胞免疫的基础上，进一步探讨携带Th1细胞因子(IL-7或IL-12)基因的rAAV/IL-7或rAAV/IL-12进一步转染增强CTL免疫活性的可行性。将rAAV/IL-7或rAAV/IL-12进一步转染DC或原始T细胞，与直接添加外源性细胞因子(IL-7或IL-12)相比较，探讨基因转染增加CTL活性的最佳途径及可能机制。结果表明：①rAAV/IL-7转染T细胞（自分泌）较转染DC（旁分泌）更能增强CTL的杀伤活性：增强刺激淋巴细胞增殖能力；ɤ干扰素表达量、CD8+:CD4+比例、CD8+CD69+细胞比例增高；CD4+CD25+(Treg)细胞比例下降；对抗原阳性靶细胞的特异性杀伤更强。②rAAV/IL-12转染DC（旁分泌）和T细胞（自分泌）后IL-12表达量相似；但转染DC（旁分泌）时，DC细胞中IL-12/IL-10表达比例增高，DC分子标志CD40、CD80、CD83、CD86阳性比率增高，刺激淋巴细胞增殖能力、ɤ干扰素表达量、CD8+:CD4+比例、CD8+CD69+细胞比例增高；CD4+CD25+(Treg)细胞比例下降；所诱导CTL对靶细胞的特异杀伤活性更强。两部分结果证明：Th1细胞因子基因转染可进一步增强CTL免疫活性，对于IL-7基因，rAAV/IL-7转染DC细胞的旁分泌途径优于原始T细胞的自分泌途径；而对于IL-12，rAAV/IL-12转染DC的旁分泌途径优于转染原始T细胞的自分泌途径。