噪声导致的耳蜗毛细胞线粒体损伤及其介导毛细胞死亡的机制研究

现代社会中工业、军事、娱乐媒体等产生的噪声已成为致聋的主要原因之一, 噪声损伤引起耳蜗毛细胞代谢紊乱和死亡可导致耳蜗功能障碍。目前对于耳蜗毛细胞死亡的通路及其机制已有初步认识，但对噪声引起的线粒体损伤以及线粒体内的细胞因子在耳蜗毛细胞死亡通路中所发挥的作用了解不多，本研究利用分子生物学、免疫细胞化学、免疫荧光和激光扫描共聚焦显微镜成像等技术，观察噪声损伤后耳蜗毛细胞线粒体内活性氮自由基ONOO-的变化及其对线粒体功能的影响，线粒体内的凋亡诱导因子AIF在噪声损伤后毛细胞死亡时的转移及影响因素，多聚ADP核糖聚合酶 PARP在毛细胞亚细胞结构的分布，特别是在线粒体的分布及噪声损伤后的变化，确定PARP-1是否介导了AIF的转移以及AIF转移是通过Caspase依赖型还是Caspase非依赖型通路来实现的。在细胞和分子水平阐明噪声导致的耳蜗毛细胞线粒体损伤及其介导毛细胞死亡的机制。

噪声已成为致聋的主要原因之一，但是目前仍无有效的方法针对噪音引起的感音神经性聋进行防治。我们查阅总结文献发现：噪声引起耳蜗的损伤是多因素的,包括机械损伤、耳蜗微循环的改变导致血流减少、代谢紊乱导致毛细胞的减少及耳蜗外侧壁血迷路屏障通透性的改变等。其中噪声引起毛细胞酶系统严重紊乱致耳蜗毛细胞内缺氧和能量代谢障碍，外毛细胞死亡是噪声性听力损伤的主要原因。耳蜗外侧壁血迷路屏障通透性增加导致的耳蜗内淋巴离子浓度的改变也可能是噪声性听力损失的原因之一。本研究采用120dBSPL白噪声建立噪声耳聋动物模型，该模型稳定并且较对照组存在显著差异的听性脑干反应（ABR）阈移。采用免疫组织化学、免疫荧光和激光扫描共聚焦显微镜成像、分子生物学等技术，研究噪声刺激后毛细胞的死亡机制，通过观察耳蜗毛细胞线粒体内活性氮自由基ONOO-的分布、含量变化，噪声暴露引起耳蜗外毛细胞凋亡情况及由此而引发的ssDNA产生，耳蜗外毛细胞死亡时EndoG的转移，线粒体内的凋亡诱导因子AIF在噪声损伤后毛细胞死亡时的转移是否同时伴随Caspase激活，以确定噪声损伤引起的耳蜗毛细胞死亡是否同时存在线粒体通路和Caspase通路，多聚ADP核糖聚合酶 PARP在毛细胞亚细胞结构的分布，特别是在线粒体的分布及噪声损伤后的变化。在细胞和分子水平阐明噪声导致的耳蜗毛细胞线粒体损伤及其介导毛细胞死亡的机制。另外，探索噪声损伤是否引起耳蜗外侧壁代谢紊乱所致的血迷路屏障通透性的改变，以及耳蜗外侧壁自由基的变化以及金属基质蛋白酶（MMP-2、MMP-9）的分布、含量变化。以阐明噪声性听力损失与耳蜗外侧壁血迷路屏障通透性改变存在着联系。