未足月胎膜早破（PPROM）患者生殖道感染“核心菌群”的鉴定、分子机制及辅助诊断价值的研究

Premature rupture of membranes (PPROM) is one of the greatest reasons leading to perinatal fetal death. In terms of curing, current clinical treatment adopts conservative therapy. However the effect is not ideal. Therefore, early diagnosis of this disease and prevention the occurrence of PPROM are major problems to be solved in obstetrics. This project firstly use Illumina high-throughput sequencing to analyse the flora diversity of vaginal fornix lavage fluid and fetal membrane between PPROM patients and normal control group, then identified the "core flora" and its abundance in the development process of PPROM. Based on the analysis of differences of cytokine expression in fetal membranes between the two groups, we figured out the molecular mechanism of "core flora" activating inflammatory signaling pathway, ECM degradation pathway, apoptosis and uterine contractions, selecting the key signaling molecules which were verified by in vitro co-culture with human amniotic membrane HAEpiC. Finally, by analyzing the difference of serum inflammatory factors and new biomarkers between the two groups, we evaluated the value of "core flora" as an early auxiliary diagnosis of PPROM and explored the best combination mode with other biological indexes. Using this model, pregnant women who have potential risks can be found in time and this research is able to establish the foundation for the early prediction and prevention of PPROM.

未足月胎膜早破（PPROM）是围产期胎儿死亡的重要原因，临床目前多为单一的期待保守治疗，效果均不理想，因此及早诊断并阻止PPROM的发生是产科亟待解决的一大课题。本项目首先利用Illumina 高通量测序技术对PPROM患者与正常对照组阴道后穹窿灌洗液及胎膜中的菌群多样性进行分析，鉴定出在PPROM发生发展过程中起关键性作用的 “核心菌群”及其丰度；然后通过对两组间胎膜组织中细胞因子表达的差异性分析，阐明“核心菌群”激活炎症信号通路、ECM降解通路、细胞凋亡及宫缩发生的分子机制，筛选其中关键信号分子，通过模式菌与人羊膜细胞HAEpiC的共培养进行体外验证；最后通过对两组间血清炎症因子及新型生物学标志物的差异性分析，评估“核心菌群”作为PPROM早期辅助诊断的价值，并联合其他生物学指标探索其最佳组合模式。利用该模式可以及时发现潜在的高危孕妇，为真正实现PPROM的提前预测并加以阻断奠定基础。

未足月胎膜早破（PPROM）引发的造成是围产期胎儿死亡的重要原因。目前产科对 PPROM 多采用传统单一的期待保守治疗，包括抑制宫缩，抗生素预防感染、糖皮质激素促肺成熟等，大约90%的孕妇将在 1 周内分娩，因此及早诊断并阻止 PPROM 的发生显得更为重要。按照计划书内容，我们收集了发生PPROM的孕妇血液样本100例，系统性分析了与PPROM发生相关的标志物，结果显示WBC、NE.%、LY.%、NE.#、RBC、HGB、HCT和NLR在PPROM和足月胎膜早破和足月正常生产孕妇之间存在差异显着（P < 0.05)。 通过建立ROC曲线，发现当WBC的cutoff值为9.63和NEU#为7.12时，它们的联合检测具有最佳的预测值，敏感性为73%，特异性为81%。该部分结果表明高危孕妇的血常规结果具备预测胎膜早破风险的价值。继续研究了尿液检查对PPROM的预测价值，结果发现当细菌的cutoff值为130.15 时，其ROC曲线下面积最大为 0.696。同样提示尿检中的细菌计数对PROM有一定的预测价值。.采用高通量测序技术分析了PPROM患者和正常产妇阴道后穹窿灌洗液中细菌的多样性和丰度。与对照组比较，PPROM组Shannon指数差异无统计学意义（P > 0.05），但Chao1指数和ACE指数显着升高（P < 0.05）。在门水平上，厚壁菌门和放线菌是两组样本中最丰富的微生物。但与对照组相比，PPROM组Tenericutes和Bacteroidetes的丰度较高，Proteobacteria和Chlamydiae的丰度较低。在类水平上，杆菌和放线菌是两组样本中最丰富的微生物。与对照组相比，PPROM组的Mollicutes丰度较高，而Betaproteobacteria的丰度较低。在属水平上，乳酸杆菌和加德纳菌是两组样品中含量最多的微生物。其中，对照组乳酸菌含量较高，而病例组加德纳菌含量较高。该部分成果充分提示PPROM患者的阴道微生物与正常孕妇不同，PPROM的发生与阴道微生物失衡有关。.在PPROM发生的分子机制研究中，我们发现铁死亡与早产的发生密切相关，通过98个早产样本和228个足月分娩样本的聚类分析，可将早产组患者进一步分成两个亚组，并最终筛选出了9个在早产中发挥重要作用的hub基因。该部分研究为早产的患者的进一步分层和个体化治疗提供了方向。