小半夏加茯苓汤诱导肿瘤细胞凋亡途径及其机制研究

本课题组前期研究显示，小半夏加茯苓汤提取液可降低肝癌SMMC-7721细胞和胃癌SGC-7901细胞中Bcl-2蛋白浓度，下调Bcl-2基因表达，这可能与细胞凋亡有关；其增强荷瘤小鼠的T淋巴细胞的增殖能力，不同情况下选择性增加CD4+T细胞及 CD8+T细胞的数量。该方上述作用提示其抑制肿瘤作用可能与其调节机体免疫功能和/或诱导肿瘤细胞凋亡等机制有关。本课题拟在前期研究基础上，探讨该方调节免疫功能和/或诱导肿瘤细胞凋亡途径及其机制，运用Western Bloting、RT-PCR及流式细胞仪等分子生物学方法研究CTL细胞诱导肿瘤细胞凋亡的途径，验证Fas/FasL介导免疫细胞凋亡与肿瘤细胞凋亡的关系，检测CD+4-Th、CD+8-TCL、DPPI、颗粒酶B、Bid、细胞色素C和Caspase-3的表达以及细胞凋亡的情况，力求揭示该方诱导肿瘤细胞凋亡的途径及部分机制。

小半夏加茯苓汤是中医治疗痰饮呕吐的经典名方，我们既往研究发现其具有显著的抗肿瘤放化疗呕吐作用，鉴于本方在配伍中充分体现中医“病痰饮者，当以温药和之”法则，结合痰湿为患是贯穿肿瘤发病之重要病机，本课题旨在运用现代科学技术研究其抗肿瘤作用及其分子机制，为临床运用和开发小半夏加茯苓汤防治肿瘤及其放化疗所致呕吐提供科学依据，实现中医理论指导下效验经方现代作用机制的有效探索。.本研究首先采用文献收集整理法，研究小半夏加茯苓汤功效与抗肿瘤作用的中医理论渊源，为运用现代科学技术手段研究其抗肿瘤细胞凋亡的分子机制提供中医理论支撑；其次运用分子生物学、肿瘤免疫学、免疫组化等现代科学研究方法和技术手段，研究原方汤剂、单味药相关组分、复方效用组分配伍对体内外肝癌H22肿瘤细胞所致肿瘤的影响，探究本方诱导肿瘤细胞凋亡的通路及作用机制。研究表明本方化痰祛湿散结功效是其现代抗肿瘤作用的中医功效基础；运用Western Bloting、RT-PCR、ELISA、IHC、MTT、TUNEL等分子生物学方法研究显示，本方汤剂及其组分对H22荷瘤小鼠肿瘤生长有抑制作用，明显改善荷瘤小鼠的生长状态；本方及其组分使fas、fasL和cytc基因表达增强，下调bcl-2mRNA，上调p53mRNA的表达；提高TNF-α，IL-2的表达，提高穿孔素，颗粒酶的表达，诱导肿瘤细胞产生颗粒酶/穿孔素途径的非自愿细胞凋亡。本方效用组分优化配比具有肿瘤抑制及免疫调节作用，其诱导凋亡作用与增强荷瘤小鼠移植瘤中颗粒酶B，Bax，Apaf-1以及Caspase-3和Caspase-8基因的表达，降低颗粒酶A、C和Bcl-2基因的表达；上调颗粒酶B、Caspase-3、细胞色素C和Apaf-1、Bax蛋白表达水平和下调Bcl-2蛋白表达水平有关。通过本研究表明小半夏加茯苓汤可调节CTL细胞的功能，诱导肿瘤细胞凋亡，即调节Fas/FasL系统和“非自愿性细胞凋亡”途径，增强CTL细胞的杀伤活性，促进肿瘤细胞的凋亡，逆转荷瘤小鼠的肿瘤免疫逃逸现象，提高机体的抗肿瘤作用。.通过本课题研究培养人才13人，其中教师7人，硕士研究生6人；完成科研学术论文6篇，其中中文核心期刊2篇，一般期刊4篇；硕士毕业论文3篇，尚有部分研究内容已经完成，论文待发表。