平喘方及拆方干预哮喘气道炎症及影响pDC/cDC介导免疫失衡机制的研究

Airway inflammation is the key link in the pathogenesis of bronchial asthma, dendritic cells affect inflammation by regulating and control Th1/Th2 and Treg/Th17 differentiation. Due to the prominent function of TLR4 on inflammation reaction, it is considered as target of asthma intervention. Preliminary study has found that Pingchuan formula and its disassembled prescriptions are effective in treatment on the basis of the asthma pathogenesis in traditional Chinese medicine (TCM),and have intervention effect for immune imbalance and airway inflammation of asthma mice. Thus we assume that immune imbalances and airway inflammation fit pathogenesis and pathology of TCM. By adjusting different or same link of pDC/cDC pathway, Pingchuan formula and its disassembled prescriptions modulate Th1/Th2 or Treg/Th17 level, so as to intervene asthma. . On the basis of early findings, this project apply immune and molecular biological technology, to research the influence of Pingchuan formula and its disassembled prescriptions on pDC/cDC mediated immune imbalance and TLR4 genetic expression, discuss the mechanism and target point, explore the relationship between “loss of qi ascending and descending”, “phlegm and blood stasis transresistance” in TCM and immune imbalance and airway inflammation. Thus to provide experimental evidence for TCM syndrome differentiation and clinical therapeutic optimization for asthma.

气道炎症和免疫失衡是哮喘发病的关键；树突状细胞（DC）在诱导、调节、维持机体免疫中起核心作用；TLR4最突出的功能是引发炎症反应，其对DC的表达和成熟有重要作用。前期研究发现：平喘方及拆方临床有良好疗效，原方对哮喘小鼠Th1/Th2及Treg/Th17的分化及气道炎症有干预作用。因此提出假设：平喘方及拆方是通过调控pDC/cDC平衡通路中某些环节而干预哮喘，TLR4可能是其作用靶点。. 本课题运用现代免疫与分子生物技术，通过观察哮喘小鼠肺组织病理，检测肺泡灌洗液及肺组织中免疫因子、骨髓DC转录、气道平滑肌TLR4mRNA表达等指标，从pDC/cDC介导的免疫失衡及TLR4基因表达等层面对比研究平喘方及拆方治疗哮喘的机制及主要靶点，阐述哮喘“气失升降”及“痰瘀互阻”与免疫失衡和气道炎症的联系，为探索哮喘各病机下中药干预的最佳方法和优化临床治疗方案提供实验依据。

背景：气道炎症和免疫失衡是哮喘发病的关键，树突状细胞(DC)在诱导、调节、维持机体免疫中起核心作用，TLR4最突出的功能是引发炎症反应，其对DC的表达和成熟有重要作用。.研究内容：本项目运用卵蛋白腹腔致敏并雾化吸入的方法建立Balb/c小鼠哮喘动物模型，造模后平喘方及拆方分别给药7天、28天，探究平喘方及拆方干预pDC/cDC免疫失衡及气道炎症的作用；通过培养原代DCs，研究平喘方及拆方干预DCs分化及下游炎症因子表达，哮喘气道炎症及DCs分化的上游靶点TLR4表达；通过对祛瘀、化痰两拆方的对比，探究哮喘“痰瘀互结”中医病机下最佳干预方法。.结果：给药7d、28d后在动物体内研究发现，与哮喘模型组比较平喘方及拆方可以缓解哮喘气道及周围组织的病理炎症，减少OX40L、IL-4、IL-6、TSLP、GATA-3、RORγt、TGF-β表达（P＜0.05），并增加IOD、IFN-γ、Foxp3、T-bet表达（P＜0.05），减少促炎因子分泌并增强免疫耐受，增加pDCs分化并减少cDCs分化，有效调控pDC/cDC的平衡并抑制Th2亢进，调控Th1/Th2的平衡。在体外细胞实验中与模型组比较，平喘方及拆方组可以显著减少哮喘模型小鼠DCs表面CD80、CD86、MHC-II的表达（P＜0.05），减低细胞中OX40LmRNA及蛋白的表达（P＜0.05），增加IDOmRNA及蛋白的表达（P＜0.05），调节哮喘小鼠pDC/cDC免疫失衡。与模型组比较平喘方及拆方可降低哮喘小鼠气道平滑肌TLR4 mRNA与蛋白的表达（P＜0.05）。祛瘀方与化痰方对比，病理HE染色示祛瘀方改善气道炎症作用略优于化痰方，化痰方在减低小鼠TSLP、IL-6表达优于祛瘀方（P＜0.05），祛瘀方减低OX40L蛋白表达优于化痰方（P＜0.05），在细胞水平祛瘀方在减少CD11b、CD80、CD86、MHC-II、OX40LmRNA与增加IDOmRNA优于化痰方（P＜0.05）。 .科学意义：平喘方及拆方可诱导哮喘模型小鼠DCs向pDC方向分化，进而调节哮喘pDC/cDC、Th2/Th1的免疫失衡，减少TLR4表达，改善气道炎症，痰瘀互结病机下“祛瘀”疗效优于“化痰”，提示哮喘治疗中应着重祛瘀药物的应用。