雄激素对Graves病发病保护性作用的实验研究

Graves病存在明显的性别差异，雄激素可能在其中起着重要作用。本课题利用分子生物学技术构建表达TSHR A亚单位（TSHR-289）的重组腺病毒，在雌性及雄性BALB/c小鼠上制备Graves病动物模型，检测相关免疫指标，研究其性别偏倚。设雄激素处理组，皮下注射不同剂量的雄激素，观察外源性雄激素是否对Graves病发病有保护性作用。同时设雄性去势组、雌性去势组，并给予TSHR-289-腺病毒诱导Graves病，观察内源性雄、雌激素对该病的影响。在此基础上，进一步研究雄激素体外刺激对免疫细胞的作用以及可能机制。该研究在已有的前期工作基础上，利用本实验室成功制备的Graves病动物模型，探索雄、雌激素对Graves病发病的影响，其方法和思路在国内外尚属空白，尤其雄激素在Graves病中的保护性作用尚无报道。其研究结果对进一步阐明本病的发病机制，探讨Graves病预防和治疗的新途径有重要价值。

Graves病是最常见的自身免疫性甲状腺疾病，女性发病明显多于男性，这种性别差异可能为雄激素在其中起着重要作用。该研究以表达TSHRA亚单位重组腺病毒（Ad-TSHR289）注射成年雌性及雄性，雌性去势及雄性去势BALB/c小鼠制备Graves病动物模型，检测TSHR抗体（TRAb），甲状腺素（TT4、FT4）等相关指标，研究其性别偏倚，探索内源性雌，雄激素对Graves病诱导的影响。以不同形式的雄激素（十一酸睾酮、二氢睾酮）预处理雌性小鼠，然后诱导Graves病发生，观察外源性雄激素在Graves病发病中的作用，检测Th1/Th2/Th17/ Treg细胞因子平衡变化以分析其作用机制。以不同剂量的二氢睾酮（DHT）预处理雌性或雄性小鼠，并给予Ad-TSHR289肌肉注射制备Graves病动物模型，研究外源性雄激素对不同性别小鼠Graves病诱导的的影响及机制。结果显示：雌性造模组甲亢发生率、及TT4平均水平高于雄性造模组、雌性去势组TRAb、TT4水平较假手术组无差异,雄性去势组TT4、FT4明显水平低于假手术组升高。睾酮组及DHT组TT4、FT4水平和安慰剂组比较均明显减低，两种不同形式的雄激素预处理可使小鼠脾脏CD4+CD25+foxp3+/ CD4+、CD4+CD25+/ CD4+比例升高，IFN-γ+/CD4+水平下降，但对IL-4+/CD4+、 IL-17A+/CD4无影响。中剂量DHT及高剂量DHT预处理的雌性小鼠TT4、FT4的平均水平明显低于安慰剂组，但两个剂量之间的甲状腺激素水平无明显差异，3种剂量DHT均使可雌性小鼠促炎性细胞因子IL-2的分泌降低，中剂量DHT预处理同时降低IFN-γ的分泌，但3种不同剂量的DHT预处理对雄性小鼠的TT4、FT4的平均水平无明显影响。结果提示：一定剂量的雄激素对雌性BALB/c 小鼠Graves病具有保护性作用，但这种保护性作用并不呈浓度梯度效应，该机制可能和Th2细胞因子分泌下调，调节性T细胞的数目和功能的改变有关。本研究结果可部分解释男女Graves病发病率的差异，有助于进一步探索从雄激素靶点预防和治疗本病的新方法和新药物。