拟穴青蟹性腺发育相关microRNA的鉴定及初步功能分析

microRNA是在真核生物中普遍存在的一类非编码单链RNA。microRNA长21-23 nt，能够通过与靶mRNA特异性的碱基配对引起靶mRNA的降解或者抑制其翻译，从而对基因进行转录后的表达调控。无论在低等的线虫还是在高等的哺乳动物中,microRNA都可通过调控基因表达，从而在动物的发生、生长、发育和分化等方面起重要作用。本项目采用新的microRNA测序方法，结合生物信息学分析和基因芯片，实时定量PCR及原位杂交等分子生物学手段克隆和鉴定与拟穴青蟹性腺发育相关的microRNA基因，研究microRNA在性腺不同发育阶段的时空表达，对若干重要的microRNA基因进行初步的功能研究，了解microRNA调控拟穴青蟹性腺发育的分子机制，为虾蟹生殖过程的人工调控提供新的思路。

拟穴青蟹是一种重要的水产养殖品种，具有很高的经济价值。青蟹不同性别的经济价值差别巨大，而青蟹的性别分化，性腺发育等方面的分子机制还不是很清楚，为此，我们从microRNA角度入手对青蟹性腺发育调控的分子机制进行了初步研究。microRNA是一种19-25bp的非编码小RNA，对靶基因有着转录后调控的作用，是新近分子生物学的研究热点之一。本项目采用高通量测序方法对青蟹的卵巢和精巢以及雌性眼柄组织和雄性眼柄组织的microRNA进行了分析。在精巢中得到436个miRs，在卵巢中得到了367个miRs；差异表达的miRs（卵巢/精巢）108个，其中上调基因59个，下调基因49个。在雄性眼柄组织中得到303个miRs，在雌性眼柄组织中得到269个miRs；差异表达的miRs（雌性眼柄/雄性眼柄）69个，其中上调基因12个，下调基因57个。通过实时定量PCR分析发现在卵巢中PC-spa-miR-O-1，-30，-50，-36，-57在多数发育阶段均显著上调，在雌性眼柄中，PC-spa-miR-E-46，-22在一些发育阶段显著上调。本项目研究首次对拟穴青蟹性腺发育相关microRNA进行了鉴定和研究，为我们了解青蟹性腺发育调控的分子机制提供基础材料。