针刺促进脊髓可塑性中细胞色素C氧化酶(cox5A)的作用及其microRNA调控

项目研究内容和意义简介：...本项目拟用基因克隆，RNA干扰等生物化学与分子生物学技术手段，探讨针刺促进脊髓可塑性过程中细胞色素C氧化酶（cox5A）的作用，并进一步探讨microRNA124对cox5A的调控。项目研究不仅对阐明针刺促进脊髓可塑性的分子机制有重要的理论意义，而且对确定与中枢神经损伤修复有关的酶蛋白新分子有重要的科学价值和应用价值。

[背景] 已知脊髓损伤后发生可塑性变化，针刺可促进这种可塑性然而其具体机制尚未阐明。细胞色素氧化酶是细胞生存与能量代谢有关的关键酶。Cox5A是细胞色素氧化酶中的一个重要成员，目前其在脊髓神经可塑性方面扮演的角色及其调控机制尚不清楚。本研究建立SD大鼠部分背根节去传入模型（切除L2-L4，L6，保留L5为备用根）。研究Cox5A在神经神经可塑性中的作用及其miRNA调控机制，为进一步寻找SCI药物干预治疗作用靶点，促进神经再生及功能恢复提供实验依据。[方法] 建立SD大鼠部分背根去传入模型（同前），针刺外周穴位（足三里，悬中；伏兔，三阴交），测定感觉功能变化， PCR 和WB定量检测Cox5A水平；免疫荧光染色定位；构建Cox5A过表达和RNA干扰载体在体内、外进行干预，检测神经细胞活力、凋亡、神经再生及神经功能变化，确定Cox5A的体内外作用；生物学信息学预测可能调控Cox5A的miRNA，Q-PCR验证；Luciferase 和mutant 实验确定miRNA和靶蛋白的调控关系。[结果] 针刺促进模型动物大鼠后肢感觉功能部分恢复。Q-PCR 和WB发现Cox5A在DRG表达增加。而Cox5A体内沉默使感觉功能遭到破坏，而过表达则能使功能得以更好恢复。体外阻断Cox5A可减少神再长生和神经存活，而过表达Cox5A则促进了细胞存活和神经生长。生物信息学分析发现micrRNA124可能调节Cox5A。但Luciferase实验证实miR-124不能影响Cox5A活性。[结论] Cox5A对针刺促进大鼠感觉功能恢复有促进作用。但miRNA124不能有效下调Cox5A表达。本研究首次发现Cox5A在针刺促进脊髓感觉恢复中调控神经可塑性，进为SCI治疗寻找新的药物靶点提供了可能，具有重要的科学意义和临床应用价值。研究成果发表SCI论文4篇，两篇已正式出版，2篇已接收。其中，Molecular Neurobiology，IF：5.471；中文核心4篇，出版专著8部。