P75介导的泛素化修饰在帕金森病α-突触核蛋白聚集中的调控机制

The molecular mechanisms underlying α-synuclein(α-syn) aggregation involved in the pathogenesis of Parkinson's disease(PD) remain to be elucidated. Recent research suggested that ubiquitination of α-syn by seven in Absentia Homolog (siAH) promoted its aggregation in dopaminergic neuronal injury. In our work, we observed that the p75 neurotrophin receptor interacted with siAH and was colocalized with α-syn in cytoplasm in models of PD. P75 also enhanced α-syn aggregation. The mechanism of p75-mediated the aggregation of α-syn via siAH is still unclear. The project is to explored the mechanism of p75-mediated ubiquitin-dependent α-syn aggregation based on our preliminary work depending Real-time PCR, Western blot, Immunoprecipitation, DNA transfection and RNA interference technology in animal and cellular models. The research will help explore the intrinsic properties of ubiquitin-dependent α-syn accumulation and provide theoretical basis for the treatment of PD.

中脑多巴胺神经元α-突触核蛋白(α-syn)聚集的分子机制是帕金森病（PD）研究亟待突破的瓶颈，近来国内外研究显示泛素连接酶siAH介导的α-syn泛素化在α-syn聚集中发挥重要作用。我们前期工作发现PD细胞和动物模型中神经营养素受体P75不仅与siAH存在相互作用，还与α-syn胞浆共定位，参与α-syn聚集调控。但P75经由siAH调控α-syn聚集机制仍不明确。本项目拟在前期工作基础上，采用Real-time PCR、Western blot、免疫共沉淀、基因转染和RNA干扰等技术，围绕P75参与调控α-syn聚集这一命题，在细胞和动物模型中探讨P75经由siAH介导的α-syn泛素化修饰及泛素化依赖的α-syn聚集机制，并初步观察对路易小体（LB）形成的影响，以期深化我们对PD多巴胺神经元α-syn泛素化聚集机制的理解，为寻找更有效的PD治疗方法提供理论依据。

背景：中脑多巴胺神经元α-突触核蛋白(α-syn)聚集的分子机制是帕金森病(PD)研究亟待突破的瓶颈，近来国内外研究显示泛素连接酶siAH介导的α-syn泛素化在α-syn聚集中发挥重要作用。前期工作发现PD细胞和动物模型中神经营养素受体P75不仅与siAH存在相互作用，还与α-syn胞浆共定位，参与α-syn聚集调控。但P75经由siAH调控α-syn聚集机制仍不明确。.研究内容：Real-time PCR、Western blot、免疫共沉淀、基因转染和RNA干扰、激光共聚焦等技术，在细胞和动物模型中探讨P75经由siAH介导的α-syn泛素化修饰及泛素化依赖的α-syn聚集机制，并初步观察对路易小体(LB) 形成的影响。.重要结果：在鱼藤酮介导在体和体外模型的多巴胺神经元中，P75的RNA和蛋白表达明显增高，泛素连接酶siAH表达明显增多，泛素化增加，siAH介导的泛素化增强促进α-syn聚集。α-syn与synphilin-1的RNA表达明显升高，但在蛋白水平是降低的。双荧光素酶基因系统研究显示转录因子P65与siAH启动子结合促进siAH表达。干预P75表达抑制大鼠旋转圈数及中脑区氧化应激水平，抑制P65的核转位，下调siAH表达及α-syn泛素化，抑制α-syn聚集，保护多巴胺神经元。因此，P75可能经siAH调控α-syn泛素化介导α-syn聚集，且α-syn和synphilin-1可能存在翻译后修饰。