基于肠道微生态的肝移植后免疫抑制调控新策略研究

免疫抑制治疗是肝移植成功的必要条件。长期大剂量免疫抑制治疗是造成移植后感染、慢性移植物失功、肿瘤复发等的主要原因之一。国内外报道指出肠道微生态与免疫抑制剂及肝脏免疫反应存在密切关系。本项目基于大鼠模型，围绕肠道微生态对肝移植后免疫抑制治疗的相互影响及其机制这一科学问题，应用DGGE指纹谱、液相质谱（LC-MS）、蛋白免疫印迹、凝胶电泳迁移率和定量PCR技术等实验技术手段，确定基础免疫抑制剂对于肠道微生态的影响并揭示其机制，探讨不同微生态制剂（抗生素、益生菌制剂、拉克替醇）干预下免疫抑制剂吸收和代谢的变化规律，阐明肝脏移植急性排斥反应中肝脏免疫反应与肠道微生态的相互作用及调控，明确上述生理病理过程及干预方法下整体代谢谱变化及其机制。研究成果可丰富肝移植后肠道微生态与免疫抑制治疗相互影响与调控的生物学理论，并为个体化免疫抑制方案提供理论依据和技术支撑。

本课题严格按照计划书方案，开展了以下方面研究：1）通过建立大鼠CCl4 肝硬化及肝硬化后肝移植模型，比较肝硬化大鼠肝移植术后肠道细菌易位的菌种和发生率，以及粪便6 大类优势菌种属及含量变化，研究肝硬化大鼠肝移植后肠道菌群的分子生态结构变化；2）采用核磁共振法（1H NMR）结合多元统计分析手段，研究肝硬化大鼠肝移植前后血清代谢组学；3）应用代谢组学研究技术，即气相色谱质谱联用技术（GC/MS）和液相色谱质谱联用技术（LC/MS），研究大鼠肝移植后宿主的代谢组学；4）通过建立不同的肝移植模型，，研究移植肝慢性失功能的病理类型、肠道菌群和宿主代谢模式的变化；5）通过kamada 二套袖法建立大鼠原位肝移植模型及DGGE 指纹图谱等多种分析方法，对肝移植大鼠肝脏病理改变及肝功能和内毒素、大鼠大便菌群、鼠肠黏膜菌群、肠黏膜结构改变以及肠道局部免疫的动态变化特点进行分析，研究肝移植排斥反应前后大鼠肠黏膜屏障细菌演替及肠道局部免疫变化特点；6）研究Campath 1H（CD52单抗）对肠黏膜屏障功能的影响及其机制，并研究小分子物质甘氨酰谷氨酰胺二肽对肠道微生态结构的影响及益生菌对营养不良大鼠肝移植后肠道屏障功能的恢复的影响；7）研究出现内毒素血症的慢性肝炎患者中检测乳糖醇的影响，结果表明，乳糖醇能够通过调节慢性肝炎患者肠道菌群，减少肠道来源的内毒素，进而降低养自由基引起的肝损伤。本研究完成课题计划书任务，为肝移植后免疫抑制调控的研究提供新视野和新思路，对肝移植免疫基础研究及临床工作具有重要的启示意义。