肝脏固有淋巴细胞亚群（ILC2）在肝硬化演变和肝癌免疫逃逸中的作用研究

There are many kinds immune cells in liver, but HBV and cancer cells can escape host immunological recognition or attack and induce hepatitis-cirrhosis-hepatoma process. ILC2 is a newly found innate lymphoid cell, which can be active without TCR. There are no studies about ILC2 in hepatitis-cirrhosis-hepatoma process. Our preliminary data showed IL-13 level increased significantly in the tissue of liver cancer and cirrhosis with HBV infection. Some studies found ILC2 is the main source of IL-13 but not Th2 cells. IL-33 has been proved to active ILC2 cells and IL-13 can active MDSC. MDSC is related with immune escape. Our project plans to study ILC2 cells in the liver in different pathologic conditions and prove "IL-33→ILC2→IL-13→MDSC→liver cancer immune escape". The result can help us to understand the role of ILC2 in hepatitis-cirrhosis-hepatoma better and provide evidence for liver cancer treatment.

肝脏内含有大量的免疫细胞，但乙肝病毒和肝癌细胞却能够轻松逃脱宿主免疫识别与攻击，演奏着肝炎-肝硬化-肝癌的三部曲。ILC2是近年来新发现的一种固有淋巴细胞，其特点是激活并不需要TCR的参与。目前有关ILC2在上述三部曲中的作用缺乏研究。我们前期预实验发现：在人乙型肝炎后肝硬化及肝癌组织中，IL-13明显升高；且有证据表明IL-13来源于ILC2细胞，而非肝内Th2细胞。既往研究表明：IL-33是一种在应激状态下由多种细胞分泌的可直接激活ILC2的细胞因子；IL-13对MDSC有活化作用；MDSC与肿瘤细胞的免疫逃逸密切相关。故本课题拟以肝内ILC2为切入点，应用多种分子生物学技术，研究不同肝脏病理状态下ILC2的变化规律，实现对IL-33→ILC2→IL-13→MDSC→肝癌免疫逃逸这一猜想的探索；以深入了解ILC在肝硬化及肝癌发生发展过程中的真正作用， 为肝癌的治疗提供新的科学依据。

固有淋巴细胞亚群2（ILC2）在炎症性疾病中的作用已得到广泛的认可，在肿瘤的发生发展中也起到了一定的作用。目前已经发现ILC2的活化参与了肝脏纤维化的发生及进展，但ILC2在肝癌免疫逃逸中的角色仍然不清。我们通过检测包括肝癌组织、癌旁组织以及良性疾病肝切标本，标记出了人体肝脏中的ILC2，发现肝癌微环境里的ILC2表型明显区别于癌旁组织中的ILC2；肝癌及癌旁配对标本（n=104）统计结果显示肝癌里ILC2的比例显著高于癌旁，而且ILC2的比例与是否感染HBV相关。对皮下荷瘤、原位荷瘤等肝癌模型的小鼠进行定期尾静脉注射由小鼠体内分离出来的ILC2，相比于注射PBS，能显著促进肿瘤的增殖及肝内转移；通过流式检测ILC2介导的肿瘤组织中有更多的中性粒细胞富集。根据从人体肝癌及癌旁组织里ILC2的表型（CD69，sT2L）及转录组测序结果，结合肝癌组织中IL-33的表达量低于癌旁组织，我们猜想在人体肝癌微环境中，ILC2的活化不依赖于其经典的刺激因子IL-33。在体外模拟了肝癌及癌旁组织微环境中的ILC2，我们发现ILC2表面的抑制性分子KLRG1与其配体E-cadherin的相互作用促进了ILC2的凋亡；相比于过表达了KLRG1分子的ILC2，敲除了KLRG1的ILC2分泌的中性粒细胞趋化因子CXCL2以及Th2细胞因子IL-13明显增强，而其所招募诱导的中性粒细胞通过增加的精氨酸酶（Arginase）抑制了T细胞的增殖及活性，从而促进了肝癌的免疫逃逸。另外，我们通过对水动力尾静脉注射（HDI）的方法建立的自发肝癌小鼠模型进行血管内染色的实验支持了正常肝脏及肝癌组织中ILC2组织固有（Tissue Resident）的特性。