ILT3在结核病单核/巨噬细胞免疫功能异常中的作用及机制

Immunosuppression receptor ILT3 induces the immunotolerance and suppresses the immune responses in cancer through suppressing cell-immunity. However, its inhibitory activity in tuberculosis is yet to be elucidated. We have found ILT3 expression in monocytes that from patients with active pulmonary tuberculosis was significantly up-regulated, especially in those from patients with refractory pulmonry tuberculosis. The expression of costimulatory molecules CD80 and CD86 in ILT3+ CD14+ monocytes were significantly lower. Blocking ILT3 signal could promote the secretion of IFN-γ. Thus we propose that ILT3 plays a vital role in inducing immunosuppression during tuberculosis. In this application, we plan to investigate the expression patterns of ILT3 in monocytes/macrophages among patients with active pulmonary tuberculosis and its relationship with prognosis of tuberculosis; the roles of ILT3 in regulating the differentiation of monocytes; the effect of ILT3 on intracellular mycobacterial growth; the role of mycobateria tuberculosis in regulating the expression of ILT3, and its regulating mechanisms. This study would find a new regulation mechanism of macrophages in tuberculosis and will lead to a better understanding of the mechanisms of tuberculosis immunosuppression and might shed light on treating refractory tuberculosis.

ILT3是主要表达于单核-巨噬细胞系统的抑制性受体，在恶性肿瘤等疾病中抑制机体细胞免疫功能，但在结核病免疫抑制中的作用尚未见报道。我们前期研究发现ILT3在活动性肺结核病人单核细胞表达显著升高，规范治疗失败的病人表达增高更显著，肺结核病人外周血ILT3阳性单核细胞表面共刺激分子CD80、CD86的表达显著降低，阻断ILT3受体可促进IFN-γ的分泌。 我们推测ILT3受体信号通路在活动性肺结核的发病和发展中发挥了关键的调控作用，计划研究：ILT3在活动性肺结核单核/巨噬细胞表达的特点及与肺结核发生和转归的关系；结核菌感染对巨噬细胞 ILT3表达及其效应功能的调节作用；ILT3对单核细胞分化及结核分枝杆菌存活的影响；ILT3对肺结核患者单核/巨噬细胞功能调控的分子机 制。本研究可能发现结核病巨噬细胞功能调控新机制，深入了解结核病的免疫抑制机制，探求结核病治疗新靶点。

免疫球蛋白样转录体3（Immunoglobulin-like transcript 3，ILT3）是免疫球蛋白样转录体(ILTs)家族成员，主要表达于单核、巨噬细胞系统，在自体免疫性疾病、移植耐受和恶性肿瘤通过耐受型抗原提呈细胞抑制机体免疫功能。本课题通过研究ILT3在肺结核患者单核/巨噬细胞表达的规律及与肺结核发病和转归的关系、ILT3对单核细胞分化的作用及对肺结核患者单核/巨噬细胞功能调控的作用，尝试阐明ILT3在结核病巨噬细胞功能抑制中的调控作用和机制，为结核病治疗提供新的靶点。本课题首先采用流式细胞术分析ILT3在不同细胞表面的表达情况，利用细胞分选+荧光定量PCR技术检测ILT3表达水平，然后比较分析ILT3表达水平与结核病发病及转归的关系。采用ILT3特异性siRNA技术沉默患者单核细胞中ILT3表达，同时诱导分化为巨噬细胞，利用流式细胞仪检测分析ILT3的表达变化对单核细胞分化的影响。构建抑制表达ILT3的巨噬细胞稳转株（RAW-ILT3-siRNA），检测分析 ILT3对于单核/巨噬细胞效应功能的影响，观测ILT3对结核分枝杆菌在巨噬细胞中存活的影响，并对ILT3介导的信号通路的调控靶基因进行检测。本研究结果发现，ILT3主要表达于单核细胞及中性粒细胞表面，且活动性肺结核患者ILT3表达显著高于正常对照和结核潜伏感染组；活动性肺结核患者支气管肺泡灌洗液中ILT3mRNA水平显著高于健康人群和潜伏感染组；ILT3mRNA在痰涂片阳性的活动性肺结核患者中表达水平也显著高于痰涂片阴性患者；肺结核患者治疗6个月后ILT3mRNA水平下降。敲低ILT3表达后，肺结核患者外周血ILT3单核细胞表面CD1a、CD80、CD86的表达显著降低，但TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-12p70的分泌量无明显变化。敲低ILT3表达后， ILT3对于结核分枝杆菌在巨噬细胞中存活的影响无统计学差异。研究结果提示ILT3可能通过调控巨噬细胞极化在抗结核感染免疫中发挥作用。