生地山茱萸药对调控糖尿病肾病中AGEs-RAGE信号通路的配伍机制研究

本项目在良好的前期研究基础上，结合中医临床与文献，创新性提出AGEs是糖尿病肾病中医病机"内热伤阴/津"的重要物质基础，生地山茱萸药对是"滋阴清热"治法主要方药体现形式，"滋阴、清热、补肾"之配伍功效主要体现在调控AGEs-RAGE信号通路的重要学术思想，拟基于体外AGEs生成和AGEs与胶原交联、AGEs致肾内皮与系膜细胞损伤及STZ复合AGE致C57BL/6J小鼠糖尿病肾病模型，先在体外筛选确证生地山茱萸主要有效部位/成分的作用特点与配伍作用环节，进而在体内外深入研究生地山茱萸水提物、含药血清提取物及经确证的有效部位/成分的作用与配伍机制，通过有序、递进式方案阐明二药在宏观与微观层面调控"AGEs-RAGE信号通路"包括清除/抑制AGEs、解离AGEs/蛋白交联、阻断AGEs-RAGE信号通路等环节的配伍作用机制。研究成果对于阐明糖尿病肾病中医病机、治法与药对配伍机制具有重要科学意义。

课题通过建立体外AGEs生成模型、AGEs与胶原交联模型、AGEs致肾内皮与系膜细胞损伤模型与STZ复合AGEs致C57BL/6J小鼠糖尿病肾病模型，对生地山茱萸水提物、含药血清提取物、生地山茱萸有效部位及有效部位配伍、单体成分等方面进行了药理作用及其机制研究。结果显示：（1）生地山茱萸合煎水提液及含药血清提取物、生地环烯醚萜苷部位、生地多糖部位、生地山茱萸有效部位配比（生地环烯醚萜苷：生地多糖：山茱萸环烯醚萜苷：山茱萸三萜酸的比例为2：2：2：1）有效成分马钱苷等对体外AGEs生成的抑制作用较强；而对胶原交联的抑制作用较弱；（2）生地山茱萸药对合煎水提液提高SOD、NO水平，降低LDH、MDA，减少TNF-α、IL-1β、vwF因子分泌，从而减轻AGEs 对HUVEC的损伤作用；生地山茱萸特征成分能够改善AGEs 对HUVEC的损伤，其中水苏糖在抗细胞损伤方面效果显著；梓醇、毛蕊花糖苷在抗细胞损伤、调节细胞分泌、抗细胞粘连、抗炎方面效果显著；马钱苷、莫诺苷、齐墩果酸、熊果酸在抗细胞损伤、抗氧化、调节细胞功能、调节细胞分泌、抗炎方面效果显著。（3）生地山茱萸特征成分能够抑制系膜细胞的增殖，其中梓醇、马钱苷在抗细胞损伤方面效果显著；熊果酸、梓醇在抗炎方面效果显著；莫诺苷、马钱苷在调节细胞分泌、抗细胞粘连方面效果显著。（4）生地山茱萸药对（合煎水提液、山茱萸环烯醚萜苷：山茱萸三萜酸：生地环烯醚萜苷比例是2:2:1、有效成分马钱苷和莫诺苷）能够显著降低糖尿病肾病小鼠血糖，改善“三多一少”症状，保护小鼠胰腺、增加胰岛素分泌，降低尿蛋白、血清肌酐、血清尿素氮和血清AGEs，增加尿肌酐的排泄，下调肾皮质RAGEmRNA、NF-κBmRNA、TGF-βmRNA，RAGE、NF-ΚB、TGF-β蛋白表达。综上研究证明生地山茱萸药对调控AGEs-RAGE信号通路发挥干预糖尿病肾病的作用。生地环烯醚萜苷、山茱萸环烯醚萜苷、山茱萸三萜酸、马钱苷、莫诺苷、梓醇这些有效部位及有效成分是临床发挥滋阴清热的重要物质基础。