以IL-17为靶标研究粗壮女贞抗类风湿性关节炎的物质基础及作用机制

Rheumatoid arthritis (RA) is a common autoimmune disease with a grave harmfulness. Current clinical drugs have unclear targets and many side effects. IL-17 is a key inflammatory cytokine involved in the RA immune response, making it as an important target for drug development. Therefore through modulating IL-17-mediated inflammatory reactions, Chinese medicines that have the function of immune regulation may exert an anti-RA effect. In the previous studies, we found that phenylethanoid glycosides from traditional Chinese medicine Ligustrum robustum (Roxb.) Blume. had immunomodulatory effects. Total phenylethanoid glycosides can inhibit the differentiation of Th17 cells and the expression of IL-17 in vitro, treat significantly the collagen-induced arthritis in mice in vivo, suggesting that this type of ingredient may antagonize RA by inhibiting the expression of IL-17. Based on these findings, this project intends to chemical separate and structural identify the compositions of phenylethanoid glycosides from L. robustum, evaluate the IL-17-regulatory activities of isolated compounds, investigate their RA therapeutic effects using in vivo animal models, and to explore their corresponding anti-RA mechanism in depth through examining the IL-17 / Th17-related cytokines, transcription factors as well as the differentiation and rate of Th17 cells. In total, this project will clarify the material basis and mechanisms of anti-RA effect of L. robustum.

类风湿性关节炎（RA）是常见的自身免疫性疾病，危害大，目前的临床药物不具有分子靶向性、副作用多。IL-17是参与RA免疫反应最主要的炎症因子，是RA药物研发重要的靶点。因此，具有免疫调节作用，尤其能调控IL-17介导炎症反应的中药是寻找抗RA药物的重要途径。我们前期发现中药粗壮女贞苯乙醇总苷①具有免疫调节作用；②可以明显抑制体外IL-17的表达和Th17细胞的分化；③体内对胶原诱导小鼠关节炎发生具有明显改善作用，提示这类成分通过抑制IL-17的表达发挥抗RA的作用。本项目以此为基础，对粗壮女贞中苯乙醇苷类成分进行分离和鉴定；对分离得到的化合物以IL-17为靶标进行活性评价；用体内动物模型评价活性化合物对RA的治疗作用，同时通过对IL-17/Th17相关的细胞因子、转录因子、Th17细胞比例及分化的影响探讨苯乙醇苷类成分抗RA的作用机制，阐明中药粗壮女贞治疗RA的药效物质基础和作用机制。

类风湿关节炎是累及周围关节为主的自身免疫性疾病，危害着人类的健康。研究表明IL-17是参与RA免疫反应的重要炎症因子，可作为RA药物的筛选靶点。传统中药粗壮女贞在民间有治疗风湿痹症的应用，但其作用物质基础和作用机制尚不明确。前期我们发现粗壮女贞中苯乙醇总苷具有免疫调节作用，可以明显抑制体外IL-17的表达和Th17细胞的分化，但其治疗RA效果仍不明确，调节IL-17的机制尚不清楚。因此，本项目对粗壮女贞中苯乙醇类成分是否具有治疗RA作用以及调节IL-17的机制进行了探讨。.本项目研究：1.共从粗壮女贞中分离鉴定了17个化合物，15个苯乙醇苷类化合物，1个黄酮苷类化合物和1个环烯醚萜苷类化合物，其中新化合物2个。2.体外对细胞因子IL-17调控评价时，我们发现所有化合物均能不同程度对CD4+T细胞分泌IL-17产生下调作用，并在转录水平下调IL-17 mRNA的表达，其中化合物acteoside效果最为显著。3.以acteoside为代表进行抗RA的体内活性评价，发现其体内对胶原诱导性小鼠关节炎的缓解症状和抑制炎症肿胀的作用不明显，效果与阳性药布洛芬相比相差显著。究其原因可能为①实验模型选择不恰当或体内注射后药物发生了变化；②实验中发现acteoside除了对IL-17有抑制作用，还能上调其他炎症细胞因子；③总苷的抗RA作用可能是多种苷类化合物的协同效果。4.调控IL-17的作用机制研究显示acteoside能够从转录和蛋白水平下调相关细胞因子；对IL-17转录因子RORγt和IRF4的表达有一定抑制作用，其IL-17分泌抑制作用可能与此有关；在下调IL-17分泌的同时，acteoside还能够降低Th17细胞的分化，减少T细胞中Th17细胞比例。体内实验虽未能证明苯乙醇苷类化合物具有抗RA的作用，但是其体外下调IL-17作用及其机制仍对粗壮女贞治疗RA具有一定科学指导意义。