肺鳞癌转移相关蛋白DJ-1促肿瘤转移的分子机制研究

DJ-1是一种与多种肿瘤相关的瘤基因，在肿瘤的发生发展中发挥着重要的作用。我们的研究不仅发现DJ-1在肺鳞癌淋巴结转移灶中的表达水平较其原发灶明显增高，而且还证实DJ-1在无转移的肺鳞癌组织中的表达较正常支气管上皮组织中增高，但是低于有转移的肺鳞癌原发灶，这强烈提示DJ-1与肺鳞癌的转移密切相关。但DJ-1究竟是通过何种机制促进肺鳞癌转移仍不明确。因此本项目拟在前期研究的基础上一方面系统分析DJ-1的表达水平改变对肺鳞癌恶性生物学特征，特别是对侵袭转移的影响，并寻找DJ-1蛋白与肺鳞癌临床特征之间的关系以阐明DJ-1在肺鳞癌转移中扮演的角色。另一方面通过以串联亲和纯化耦联质谱技术为主的靶向蛋白质组学技术分离、鉴定肺鳞癌细胞中DJ-1 蛋白的相互作用蛋白，发现DJ-1与其相互作用蛋白作用时动态分子网络的改变特征，从而阐明DJ-1的促肺鳞癌转移的分子机理，为肺鳞癌转移的防治研究提供新线索。

DJ-1是一种与多种肿瘤相关的瘤基因，为研究DJ-1基因与肺癌发生发展关系，我们采用RNAi技术稳定干扰SK-MES-1（肺鳞癌细胞株）、HTB-182(肺鳞癌细胞株)、HBE(正常支气管上皮细胞)细胞系中DJ-1的表达建立稳定剔除DJ-1基因的细胞系，采用MTT、平板克隆形成试验、流式细胞分析技术、划痕实验、Transwell侵袭与迁移实验等对其进行生物学特性的分析。制作组织芯片，应用免疫组化检测DJ-1分别在正常支气管上皮组织（20例）、无转移的肺鳞癌组织（30例）、有转移的肺鳞癌原发灶组织及其转移灶的肺鳞癌组织中（30例）、其他类型肺癌组织（20例）的表达情况，并分析DJ-1蛋白与肺鳞癌临床特征之间的关系。构建带有TAP标签的DJ-1质粒，稳定转染肺鳞癌细胞系上调DJ-1的表达，采用串联亲和纯化耦联质谱技术为主的靶向蛋白质组学技术分离、CO-IP鉴定肺鳞癌细胞中DJ-1 蛋白的相互作用蛋白。结果如下：在稳定剔除DJ-1基因的细胞系中，DJ-1 siRNA 干扰组中DJ-1蛋白表达明显低于Control-siRNA组和空白对照组；MTT法结果显示干扰组的细胞增殖速度明显抑制；平板克隆实验结果显示干扰组细胞增殖能力降低；流式细胞术结果显示干扰组G1期和G2期细胞数比例增高，S期细胞比例减少；Tanswell小室迁移实验结果显示干扰组的迁移能力降低（P<0.05）。这些结果提示DJ-1具有促进肿瘤生成和转移、抑制凋亡的作用。免疫组化法结果显示DJ-1在无转移的肺鳞癌组织、有转移的肺鳞癌组织以及其他类型肺癌组织中的表达分别与正常支气管上皮组织中的表达相比均明显增高，而它在有转移的肺鳞癌组织的表达也明显高于无转移的肺鳞癌组织，这表明DJ-1不仅与肺癌的癌变相关，而且在肺鳞癌的转移中发挥着重要的作用。构建带TAP标签质粒，采用脂质体稳定转染细胞株HTB-182、Park7-RNAi-HTB-182、SK-MES-1、Park7-RNAi-SK-MES-1，挑选阳性克隆进行DJ-1相互作用蛋白的筛选。采用串联亲和纯化耦联质谱技术为主的靶向蛋白质组学技术分离鉴定肺鳞癌细胞中DJ-1 蛋白的相互作用蛋白，此实验进行了二次预实验，尚未得到理想结果，实验还在进行中。