滋肾养肝方药调控胎肝干/祖细胞在硬化肝脏中的分化取向及其机制

干细胞有望取代原位肝移植，成为肝硬化治疗的新手段，其体内分化取向是影响其发展的关键问题。基于胎肝干细胞替代原位肝移植的潜在优势，结合滋肾养肝复方一贯煎诱导干细胞向肝细胞分化的证据，提出并论证"胎肝干细胞在进展期硬化肝脏中可能向肌成纤维细胞分化，呈现促纤维化作用；一贯煎可能诱导胎肝干细胞向功能性肝细胞分化，与胎肝干细胞联合可能发挥促进硬化肝组织结构重建的综合优势，其主要机制可能与调控巨噬细胞亚群的平衡有关"。研究以硬化肝脏重建为切入点，以胎肝干细胞和一贯煎为研究对象，建立2-乙酰氨基芴/四氯化碳F344雌性大鼠肝硬化模型，采用雄性Dlk+胎肝干细胞移植、异硫氰酸荧光素标记的Y染色体探针、多重免疫荧光激光共聚焦及流式细胞等技术，探明Dlk+胎肝干细胞在硬化肝脏中的分化取向、一贯煎对其影响及主要机制，评价胎肝干细胞联合一贯煎治疗肝硬化的潜在优势，为发展中医药联合干细胞移植治疗肝硬化奠定科学基础。

背景与目的：干细胞有望成为肝硬化治疗的新手段，但其体内分化取向是影响其发展的关键问题。一贯煎是临床治疗肝硬化的常用方剂，但其对干细胞分化的调控作用尚不明确。本研究旨在：（1）明确在肝硬化病理微环境中，肝干细胞的分化取向及其机制；（2）明确胎肝干细胞(FLSPC)移植对进展期肝硬化的修复作用及机制；（3）观察一贯煎对硬化肝脏自体干细胞及移植FLSPC分化的调控作用。.方法：（1）制备2-AAF/CCl4肝硬化模型，探讨肝脏自体干细胞的分化取向及一贯煎对其影响；（2）制备胆管结扎(BDL)胆汁性肝纤维化模型，探讨肝脏自体干细胞的分化取向；（3）制备2-AAF/CCl4肝硬化模型，观察FLSPC移植对肝损伤的修复作用及机制，观察一贯煎对其分化的影响；（4）体外将肝干细胞与活化的巨噬细胞共培养，探讨肝干细胞的分化取向及一贯煎对其影响。.结果：（1）在2-AAF/CCl4诱导的肝硬化模型，肝干细胞主要向肌成纤维细胞(Myofibroblasts, MFs)分化，非经典Wnt信号通路参与这一过程。一贯煎可抑制非经典Wnt信号通路，进而抑制肝干细胞向MFs分化，发挥抗肝纤维化作用。（2）在BDL肝纤维化模型，肝干细胞主要向新生胆管上皮细胞分化，Notch信号通路参与这一过程，阻断Notch信号通路可有效抑制肝干细胞向胆管上皮细胞分化。（3）FLSPC移植能够显著改善2-AAF/CCl4诱导肝硬化模型大鼠的肝功能，抑制纤维化进展，移植后的FLSPC主要向肝实质细胞分化，与一贯煎联合应用其效果更为显著，其机制与调节巨噬细胞亚群平衡进而调节Wnt信号通路的活化有关，即抑制促炎巨噬细胞的活性，促进抗炎巨噬细胞的活性，显著提高经典Wnt信号通路Wnt10B、FZD1、FZD4、FZD5和LRP5的表达；显著抑制非经典Wnt信号通路Wnt4A、wnt5A、FZD2和 FZD3的表达。（4）体外活化的巨噬细胞可诱导肝干细胞向MFs分化，一贯煎也通过调节巨噬细胞亚型平衡进而抑制肝干细胞向MFs分化。.结论：在不同致病因素所致的肝硬化微环境中，肝干细胞的分化取向不同，抑制自体干细胞的增殖与分化有利于肝损伤的修复，但FLSPC移植能够有效促进肝损伤修复，一贯煎对肝脏自体干细胞及移植FLSPC的分化均有调控作用，其主要机制与调控巨噬细胞亚群平衡进而调节Wnt信号通路有关，为其临床应用提供了科学证据。