拟南芥PPR基因AtECB2调控叶绿体转录本编辑及叶绿体发育的分子机理

PPR members are widely involved in RNA editing in chloroplast. However, its molecular mechnism is quite limited. AtECB2 is a member of PPR-DYW. It regulates the editing of three sites in accD and ndhF, and chloroplast development through PEP-dependent plastid gene expression. In this project, we will investigate the molecular mechnism of AtECB2 in regulating RNA editing and chloroplast development using comprehensive techniques including genetics, molecular biology and biochemistry. This project will: 1) identify the binding sites of AtECB2 in accD and ndhF and the function of DYW domain for RNA editing; 2)characterize the factors associated with AtECB2 for RNA editing and analyze the involvement of MORFs(Multiple organellar RNA editing factor) in this process; 3)investigate the mechnism that AtECB2 affect PEP-dependent plastid gene expression.

叶绿体中PPR家族成员广泛参与质体转录本的RNA编辑，但是对其分子机理的了解非常有限。AtECB2是该家族DYW亚群中的成员，调控拟南芥叶绿体转录本accD 和ndhF上3个位点的编辑，以及通过PEP(plastid encoded polymerase)依赖的质体基因表达调控叶绿体发育。本项目将结合遗传学，分子生物学和生物化学等相关技术深入研究ECB2调控叶绿体转录本编辑及叶绿体发育的机理，包括：1）确定AtECB2结合其靶位点序列及DYW结构域与RNA编辑的关系；2）鉴定与AtECB2一起参与RNA编辑的组分,分析与MORFs(Multiple organellar RNA editing factor)蛋白质家族是否有相互作用；3）阐明AtECB2影响质体基因表达的机理。

叶绿体RNA编辑是基因转录后加工的一种主要形式，负责将前体RNA上特定位点的胞嘧啶C转换为尿嘧啶U。RNA编辑依赖于一大类的PPR家族蛋白和众多非PPR蛋白。我们前期的工作分离鉴定到了一个PPR蛋白AtECB2功能缺失的突变体atecb2-1，该突变体中叶绿体基因accD以及ndhF的编辑效率严重下降，但其分子机理不清楚。本项目中，我们对AtECB2调控叶绿体基因RNA编辑的机理进行了深入研究，取得了以下重要结果：1、RNA免疫共沉淀实验证明了AtECB2能够直接参与叶绿体基因的编辑过程。2、AtECB2的DYW结构域具有锌离子结合能力且对RNA编辑是必须的。3、质谱分析鉴定到了一个新的RNA编辑因子HEMC。4、HEMC介导AtECB2与非PPR蛋白MORF8互作。这些结果有助于进一步的了解叶绿体RNA编辑过程。