游离脂肪酸对人血管平滑肌细胞TLR4信号调控机制研究

TLR4与2型糖尿病动脉粥样硬化、血管炎症反应和胰岛素抵抗有密切关系。本研究以TLR4与2型糖尿病大血管病变之间的关系为切入点，首次研究游离脂肪酸(FFA)调控人血管平滑肌细胞（Hvsmc）TLR4及其下游炎症因子表达的分子机制。研究内容： ①FFA调节Hvsmc TLR4基因表达的剂量和时间依赖关系。②FFA对Hvsmc TLR4信号下游炎症因子MCP-1，IL-6等基因表达水平的影响。③构建TLR4 shRNA表达载体，转染Hvsmc，沉默TLR4基因转录，研究 TLR4信号在FFA调节炎症因子 MCP-1和IL-6等基因表达中的作用。④转录因子在FFA调节TLR4信号中的作用。 研究意义：有助于阐明FFA调节Hvsmc TLR4基因表达的分子机制，揭示炎症反应在2型脉粥样硬化发生机制中的作用，为今后将TLR4做为2型糖尿病抗炎治疗的靶点，预防和治疗2型糖尿病大血管病变提供理论依据。

游离脂肪酸对人血管平滑肌细胞TLR4信号调控机制研究.摘要 炎症是2型糖尿病大血管并发症的主要病理机制，游离脂肪酸（FFA）是主要致病因素，然而如何选择抗炎靶标是目前亟需解决的难题。近期的研究表明：TLR4很可能是联系2型糖尿病天然免疫、血管炎症反应和胰岛素抵抗的关键因子。本研究以TLR4与2型糖尿病大血管病变之间的关系为切入点，研究游离脂肪酸(FFA)调控人血管平滑肌细胞（Hvsmc）TLR4及其下游炎症因子表达的分子机制，以期进一步阐明TLR4信号介导的炎症反应在2型脉粥样硬化发生机制中的作用，为今后将TLR4做为2型糖尿病抗炎治疗的靶点，预防和治疗2型糖尿病大血管病变提供理论依据。研究内容包括：①FFA调节HA-VSMC TLR4基因表达的剂量和时间依赖关系。②FFA对HA-VSMC TLR4信号下游炎症因子表达水平的影响。③构建TLR4 shRNA腺病毒表达载体转染HA-VSMC，研究TLR4信号在FFA调节炎症因子表达中的作用。④转录因子NF-KB在FFA调节炎症因子表达中的作用。⑤FFA对血管平滑肌细胞的细胞生物学行为（如细胞增殖和细胞迁移）的影响是否通过TLR4信号途径？⑥ 初步探讨活性VitD3对FFA诱导的HA-VSMC炎症反应的抑制作用。结果发现：FFA促进HA-VSMC TLR4基因表达且具有时间和剂量依赖效应；FFA通过激活TLR4/NF-κB通路诱导HA-VSMC MCP-1、IL-6和IL-8等炎症因子表达，导致HA-VSMC产生炎症反应；采用pGSadeno-TLR4 shRNA阻断TLR4信号则抑制FFA刺激的血管平滑肌细胞的增殖和迁移,1,25（OH）2VitD3显著抑制HA-VSMCTLR4及其下游炎症因子的表达。本研究证实：TLR-4/NF-κB信号通路介导了FFA诱导HA-VSMC的炎症反应，提示TLR4信号在FFA诱导HA-VSMC的炎症反应和动脉粥样硬化的发生和发展过程中发挥了重要的作用，为今后将TLR4作为2型糖尿病抗炎治疗的新靶标和探索新的干预途径提供了有力的理论依据，也为今后深入研究1,25（OH）2VitD3对2型糖尿病大血管并发症的防治作用奠定了基础，具有较高的理论研究价值和一定的临床应用前景。