周细胞LRP-1和CD206受体共同调控整合素β1通路影响脑缺血再灌注后“无复流”的机制研究

The “no-reflow” phenomenon is the main cause of no benefit from thrombolysis in ischemic stroke patients. Recently, researchers consider the “no-reflow” phenomenon is releated with constriction of pericytes, but the mechanisms are still not fully elucidated. Our previous work demonstrated that after oxygen-glucose deprivation, LRP-1 and CD206 receptors were highly expressed at pericytes, which could endocytose TGF-β1 and MMP-9 resulting in itself constriction. Based on the previous work, we will use tMCAO model, combined with applying lentivirus transfection, in-situ hybridization, western blot, brain perfusion image, transmission electron microscope and other methods, to study the molecular mechanisms of pericytes constriction which is mediated by endocytosis of TGF-β1 and MMP-9, activation of integrin-β1/ILK/α-SMA pathway after ischemic stroke. We will investigate whether TGF-β1/integrin-β1 can be treated to suppress constrict reaction of pericytes and to improve “no-reflow” phenomenon. Our study will further replenish the pathological mechanisms of “no-reflow” phenomenon, and provide new idea and strategy to improve the efficiency and prolong the time window of intravenous thrombolysis.

缺血再灌注后的“无复流”现象，是脑梗死患者溶栓不受益的重要原因。近来认为，“无复流”与周细胞收缩有关，但分子机制不明。我们前期发现，缺血缺氧后，周细胞高表达LRP-1和CD206受体，转变为具有吞噬功能的细胞，吞噬细胞外TGF-β1和MMP-9，引起周细胞收缩。本项目拟在此基础上，运用tMCAO模型，结合病毒转染、原位杂交、灌注显像、透射电镜等技术，阐明脑梗死后，周细胞通过LRP-1受体吞噬TGF-β1；通过CD206受体吞噬MMP-9，并将胞内非活化的latent-TGF-β1转变成活化的TGF-β1；共同通过TGF-β1/integrin-β1/ILK途径，上调α-SMA表达，引起周细胞收缩的分子机制。探讨能否通过阻断TGF-β1/integrin-β1结合，抑制周细胞收缩，改善“无复流”。本课题将有助于了解“无复流”的病理机制，并有望为提高溶栓的临床疗效和延长治疗时间窗提供新的策略。

缺血性脑卒中再灌注损伤引起的血脑屏障（BBB）破坏是一个复杂的过程，会导致损伤进一步加重。脑内周细胞通过与其他成分相互作用，在维持BBB的完整性方面起着至关重要的作用。本项课题研究，通过各种在体及体外实验，我们证明了脑微血管周细胞能在缺血发生的早期，在HIF-1α的介导下，能特异性表达并且快速上调 CD206 受体，并特异性的内吞并清除内源性 tPA，起到保护血脑屏障的作用。我们同样还发现在体内和体外缺血后周细胞中表达的鞘氨醇-1-磷酸受体（S1PR）2显著上调。用S1PR2拮抗剂（JTE-013）研究了S1PR2对短暂性大脑中动脉闭塞（tMCAO）大鼠和体外BBB模型BBB通透性的作用。此外，我们还发现S1PR2可能通过NF-kB p65信号降低N-钙粘蛋白的表达，增加周细胞的迁移，并发现miR-149-5p对S1PR2有负性调节作用，且miR-149-5p在缺血边缘区和缺血后培养的周细胞中降低。miR-149-5p在培养周细胞中的过度表达显著增加了N-钙粘蛋白的表达，减少了周细胞的迁移，从而减少了体外模型中BBB的渗漏。侧脑室注射agomir-149-5p上调miR-149-5p可显著降低tMCAO大鼠BBB通透性，改善tMCAO大鼠的预后。因此，我们的实验研究提示CD206以及miR-149-5p可能是治疗缺血性卒中后BB