特异性miRNA在肝郁脾虚型肠易激综合征早期诊断中的作用及痛泻要方的干预机制研究

Irritable bowel syndrome is a common functional intestinal disease, it belongs to abdominal pain,diarrhea,depression in traditional Chinese medicine science.As the mechanism is not clear, there is no effective measure to treat it. Prior period studies confirm that IBS has a group of specific protein, so we conjecture that IBS may have a group of specific miRNA which can early diagnose IBS. Tongxieyaofang is the common traditional Chinese medicine to treat IBS. But its efficacy mechanism is not clear. This project is first to calculate miRNA of IBS, through the rectum stimulation to establish IBS rat model, and with Tongxieyaofang as intervention. We will check the relationship of miRNA by RT-PCR test, and screen the specific expressive miRNA of IBS and analyse the sensitivity and specificity of detection by Liquid chip technology to confirm the simple and specific and sensitive and accurate miRNA cerum mark which is used for clinical diagnosis, and to build systematic diagnostic approach. This project is to quicken the clinical course, to build specific and sensitive and accurate and convenient testing method, and at the same time to further understand the mechanism of Tongxieyaofang, to set a stage for developing new medicine.

肠易激综合征（IBS）是常见的功能性肠道疾病，属中医学腹痛、泄泻、郁证等范畴，因机制不明，故缺少客观有效诊治措施。前期研究证实IBS存在特异的蛋白表达差异，故推测IBS可能存在特异的miRNA组可作为早期诊断的客观指标。痛泻要方可疏肝理气，前期研究已证实可治疗IBS，但其作用靶点尚不明确。本项目通过建立IBS肝郁脾虚大鼠模型，以痛泻要方为干预，以RT-PCR验证大鼠组织和血清中miRNA表达谱的相关性，运用高通量的液相芯片检测技术进一步筛查IBS特异表达的miRNA，分析其检测的灵敏性及特异性，从而确定适用于临床诊断的检测简便、特异性和敏感性强、准确率高的血清标志物，建立IBS临床诊断方法，为IBS的早期诊断、评估和随访建立特异度、敏感度、精确度及便利度更高的检测手段奠定实验基础；并从分子水平阐明痛泻要方治疗IBS的药效机制，为中医药治疗胃肠功能性疾病提供理论依据。

背景：肠易激综合征（IBS）缺乏可以解释的形态学或生化检查异常，由于IBS的病因和发病机制不明确，临床上缺乏有效的诊治手段，近年来发现了许多与IBS发病可能相关的基因，我们推测IBS也存在一组特异表达的miRNA组。痛泻要方，为《丹溪心法》所载的名方，适用于IBS的治疗。对于miRNAs的研究多集中于肿瘤，关于肠易激综合征相关性miRNA的研究很少。研究目的和内容：研究通过直肠刺激建立IBS肝郁脾虚证大鼠模型，以痛泻要方作为干预治疗手段，帅选IBS大鼠结肠组织miRNA表达谱，并进一步对比IBS大鼠痛泻要方治疗组之间结肠组织miRNA的差异表达，从分子水平阐明痛泻要方治疗IBS的药效机制和作用靶点。结果：IBS大鼠血清以及结肠组织IL-1β表达增高，通过液相芯片技术筛选出一组IBS大鼠结肠组织表达增高的基因组（nos1、il1b、htr3a），同时也筛选出IBS大鼠结肠组织表达上调的miRNA表达谱（let-7f，let-7i，miR-130b，MiR-29a，miR-132，miR-21，miR-375）以及表达下调的miRNA表达谱（miR-24，miR-31a，miR-192，miR-221，miR-223），并且以痛泻要方作为干预措施，发现肠易激综合征大鼠在痛泻要方的作用下let-7f，let-7i，miR-130b，MiR-29a，miR-132，miR-21，miR-375在结肠组织的表达低于治疗对照组，而miR-24，miR-31a，miR-192，miR-221，miR-223的表达高于治疗对照组。结论：IBS并不是单纯的功能性疾病，其中存在着复杂的调控网络，而基因和miRNA之间也存在着交同错的调控网络，这需要进一步的深入研究，以miRNA为切入点，寻找相关的调控基因，反之，以基因为切入点，寻找相关的双相调控的miRNA，为进一步阐明IBS的机制，为研制新药，研制早期评估和预后判断的试剂奠定理论基础。我们通过检测获取了肠易激综合征大鼠结肠粘膜表达上调和下调的miRNA表达谱，是我们今后深入研究的方向，也为IBS的治疗提供了新的靶点。而痛泻要方作为肠易激综合征的经典方，该研究为中医药治疗肠易激综合征提供了理论基础，也为将来研制更多有效的新药奠定基础。