MicroRNA363、钙离子通道蛋白A1对美罗华免疫化疗治疗弥漫大B细胞淋巴瘤疗效预测作用和机制的研究

本项目研究microRNA363、钙离子通道蛋白A1对弥漫大B细胞淋巴瘤美罗华免疫化疗疗效的预测作用和机制，旨在指导个体化治疗，寻找提高其疗效的方法。研究分五部分：①通过定量RT-PCR和原位免疫杂交检测患者microRNA363表达对疗效预测的作用；②免疫组织化学法检测患者CACNA1C、CACNA1I和CD20表达对疗效预测的作用。导入DLBCL细胞株CACNA1C和CACNA1I的shRNA验证其在美罗华免疫化疗诱导细胞凋亡中的作用；③应用luciferase、基因转导和反义抑制的方法研究microRNA363对CACNA1C和CACNA1I的负调控作用；④应用CGH和染色体免疫沉淀的方法研究X染色体不稳定性和C-MYC蛋白对microRNA363表达的影响；⑤移植鼠模型体内研究microRNA363、CACNA1C和CACNA1I表达对美罗华免疫化疗疗效的影响。

项目完成情况：本项目围绕microRNA363、钙离子通道蛋白A1对弥漫大B细胞淋巴瘤美罗华免疫化疗疗效的预测作用和机制开展研究，旨在指导个体化治疗，寻找提高其疗效的方法。研究对象包括应用美罗华免疫化疗初始治疗的111例弥漫大B细胞淋巴瘤患者和2种弥漫大B细胞淋巴瘤细胞株。研究方法采用了实时定量RT-PCR、免疫组织化学、Western杂交、流式细胞术联合Annexin-V和Indo-1 AM检测凋亡和钙离子内流、luciferase、基因转导和反义抑制等。研究结果证实了microRNA363的表达量与美罗华免疫化疗疗效呈负相关，钙离子通道蛋白A1的表达与美罗华免疫化疗疗效呈正相关，且基因和蛋白表达相一致。钙离子通道蛋白A1是microRNA363的靶基因。过表达和反义抑制microRNA363均会影响钙离子通道蛋白A1的蛋白表达，也影响细胞株对美罗华免疫化疗的反应。钙离子通道蛋白A1的特异性抑制剂能够减少钙离子内流信号，同时减少了美罗华免疫化疗诱导的凋亡。因此，microRNA363、钙离子通道蛋白A1影响美罗华免疫化疗疗效的机制为干扰了美罗华介导的钙离子内流相关的细胞凋亡。研究进一步探讨了microRNA363被调控的机制，发现了调控其表达的启动子区含有多个甲基化位点，甲基化程度与microRNA363表达量呈负相关，决定了其表达量的多少。.取得的成果：①在《BLOOD》以共同贡献作者发表论文1篇；指导研究生在国内核心期刊发表文章1篇；投稿等待《JHO》接受论文1篇。②研究过程中还发现microRNA363可以调控其它类型钙离子通道蛋白的表达，可能与弥漫大B细胞淋巴瘤转移和进展有关，《Clinical Cancer Research》审稿意见认为值得深入研究，相关研究正在进行。③培养硕士研究生3名。④举办国家级继续教育1期。