HGF/c-Met促进葡萄膜黑色素瘤侵袭和转移的分子机制研究

Uveal melanoma has a high propensity to develop hepatic metastases. HGF/c-Met are potent mediators of uveal melanoma liver metastasis. Based on our previous research results, which HGF/c-Met-induced uveal melanoma migration depends on PI3K/Akt pathway, this project focuses on the effect of HGF-triggered uveal melanoma invasion and liver metastasis and the mechanism underlying this metastatic homing. The expression and activity of MMPs and uPA stimulated by HGF/c-Met is confirmed using RT-PCR, western blotting and zymography. Reducing MMPs and uPA expression with small interfering RNA attenuates HGF/c-Met-induced cell invasion of uveal melanoma.Using cDNA microassay,target genes up-regulated by HGF will be found.We try to investigate the role of those genes in HGF-mediated uveal melanoma cell invasion and metastasis. A visualization of mouse model is subsequently used to study the role of HGF/c-Met and its downstream effectors in inducing liver metastasis of uveal melanoma cells in vivo by administrating c-Met inhibitor PHA665752. This study investigates the mechamisms required for preferential liver metastatic homing and provides biologic relevance for uveal melanoma clinical behavior with potential therapertic implications.

葡萄膜黑色素瘤是一种高度继发肝转移的肿瘤。肝细胞生长因子（Hepatocyte growth factor, HGF）及其受体c-Met与葡萄膜黑色素瘤肝转移密切相关，但转移的分子机制还不清楚。本课题组在明确HGF/c-Met通过调控PI3K/Akt信号通路促进葡萄膜黑色素瘤细胞迁移的基础上，拟深入研究HGF/c-Met对MMPs和uPA转录水平、蛋白表达以及酶活性的影响，研究siRNA沉默MMPs和uPA表达对HGF诱导的葡萄膜黑色素瘤细胞侵袭能力的影响；使用基因芯片技术发现HGF介导的其他分子，探讨其与葡萄膜黑色素瘤侵袭和转移的关系；通过建立可视化的葡萄膜黑色素瘤转移模型，研究c-Met激酶抑制剂PHA665752对葡萄膜黑色素瘤转移表型的影响，并研究下调c-Met磷酸化对下游信号通路的影响，从而阐明葡萄膜黑色素瘤高度继发肝转移的机制，为葡萄膜黑色素瘤的治疗提供新的治疗思路和作用靶点。

葡萄膜黑色素瘤是成人眼内最常见的肿瘤。半数以上的原发性葡萄膜黑色素瘤患者会发生转移，其临床分期主要取决于肝内进展。但目前对于转移性葡萄膜黑色素瘤还没有有效的治疗方法。HGF/c-Met与葡萄膜黑色素瘤肝转移密切相关，c-Met有望成为治疗葡萄膜黑色素瘤的新方向或靶点。我们的研究发现，c-Met 激酶抑制剂PHA665752可以抑制葡萄膜黑色素瘤细胞增殖和HGF诱导的细胞迁移和侵袭，减缓裸鼠皮下肿瘤生长，其分子机制是通过抑制PI3K/AKT信号通路来实现的。另外，我们通过基因芯片筛选受HGF调控并与葡萄膜黑色素瘤侵袭和转移相关的信号分子，发现NF2和TIMP3 在HGF表达后，其mRNA和蛋白水平显著下降。干扰NF2或TIMP3可以促进葡萄膜黑色素瘤细胞迁移，相关机制还需要进一步探索。化疗已广泛应用于癌症患者的治疗。尽管在过去的几十年里，癌症治疗取得了巨大的进展，但耐药性仍是肿瘤转移和复发的一个重要原因。越来越多的证据显示，microRNAs在调控肿瘤细胞对化疗药物的耐药性中发挥了重要作用。我们的研究发现，miR-106a促进人胶质瘤细胞对顺铂和吉非替尼的耐受。其主要是通过增加药物排出，逃避凋亡，促进损伤的DNA修复，调控肿瘤微环境，激活耐药相关分子及信号通路等多种机制来调控肿瘤耐药性。这提示miR-106a可以作为治疗人胶质瘤多药耐药的潜在靶标。另外，我们还做了MicroRNA对视网膜的作用，发现miR-34a低表达于未融合的视网膜上皮(RPE)细胞。转染miR-34a可以抑制RPE细胞的增殖与迁移。由于LGR4是miR-34a的靶基因，我们还发现在小鼠中敲除LGR4可以引发年龄相关性白内障，对其分子机制进行初步探讨，发现LGR4基因敲除削弱了小鼠晶体的抗氧化损伤能力，我们同时也发现LGR4基因敲除降低了晶体上皮细胞中抗氧化酶类的表达。