肝癌磁共振成像的高效靶向造影剂CS-LA@SPION的制备及应用基础研究

超顺磁氧化铁纳米颗粒在磁共振成像对比度增强、免疫测定和细胞分选等方面有着广阔的应用前景。前期研究表明壳聚糖和乳糖酸修饰材料的超顺磁氧化铁纳米颗粒(CS-LA@SPION)能很好的与肝细胞结合；CS-LA@SPION的Tc-99m标记化合物主要被肝所摄取。本研究选用CS-LA@SPION，合成能够高效标记肝癌细胞的荧光衍生CS-LA@SPION磁性纳米探针；检测不同表面性质、聚集态的磁性纳米颗粒对肝癌细胞的作用；研究CS-LA@SPION摄入癌细胞的动力学过程；构建体内外特异性靶向肝癌细胞的分子影像探针抗VEGF-SPION抗体磁性纳米颗粒，探讨生理环境下其稳定性、高免疫活性，以及抗VEGF-SPION抗体造影剂对肝癌特异性诊断的价值和意义，为临床诊断提供新方法。

本课题组制备了肝细胞癌VEGFR-2靶向免疫磁性纳米探针（TTAC-0001-CLSN），圆满完成了4项计划研究内容。（1）制备了肝细胞受体显像剂99mTc标记的乳糖酸-壳聚糖复合物（99mTc-LA-CS）。利用核磁共振氢谱（1H NMR）对其进行了结构表征；体内γ照相观察注射显像剂后不同时间肝脏的放射性摄取；并进行体内生物分布分析，阐明了99mTc-LA-CS对肝细胞特异性摄取；（2）壳聚糖与乳糖酸偶联修饰超顺磁性氧化铁纳米颗粒（CS-LA@SPION），采用透射电镜与动态光散射纳米粒度分析仪对其进行形貌表征；MTT法检测细胞毒性；利用体内外MR成像验证磁性纳米粒对肝细胞的靶向增强作用；普鲁士蓝染色观察肝细胞铁颗粒摄取情况。证明了ASGP-R介导的CS-LA@SPION对肝细胞具有特异靶向性；（3）利用异硫氰酸荧光素（FITC）标记CS-LA@SPION，合成荧光-磁共振双功能纳米探针FITC-CS-LA@SPION，采用荧光显微镜和流式细胞仪检测与肝细胞体外结合情况；通过体外MRI成像观察细胞数量与MRI信号变化的关系，进一步证实和确认FITC-CS-LA@SPION对肝细胞具有较强的特异性结合力，具有作为多模式成像探针的潜力；（4）以乳糖酸和壳聚糖作为纳米载体，表面修饰VEGFR-2抗体和SPION，制备血管内皮生长因子受体2（VEGFR-2）靶向磁共振分子探针，测定其水合粒径和Zeta电位；采用MTT法测定靶向探针对正常肝细胞HL7702和人肝癌HepG2细胞活性率的影响；免疫细胞荧光检测肝癌细胞VEGF表达；普鲁士蓝染色观察肝癌细胞铁颗粒摄取情况；采用荧光标记物Cy5.5标记，与HepG2细胞孵育后，用活体成像仪对细胞悬液进行荧光成像；体外MR成像验证VEGFR-2靶向MR分子探针对肝细胞癌的特异性增强作用。