靶向具有肿瘤干细胞和EMT双表型的循环肿瘤细胞：Disulfiram在抑制乳腺癌转移中的作用机制研究

我们已经证实循环肿瘤细胞(CTC)是乳腺癌的不良预后因素。只有具有肿瘤干细胞(CSC)和上皮间质转化(EMT)双表型的乳腺癌CTC才能形成转移灶，而ALDH1和NFκB分别在CSC和EMT中发挥重要作用。新近研究显示：能负性调控ERK/NFκB/snail通路的ALDH1抑制剂Disulfiram具有抗肿瘤活性。因此我们推测：Disulfiram可通过抑制ALDH1抑制肿瘤干细胞样CTC的干性；通过抑制NFκB，逆转EMT，降低CTC的侵袭性，并进一步减少干细胞样CTC的产生；而失去CSC和EMT表型的CTC最终会凋亡，无法形成转移灶。本课题以具有CSC和EMT双表型的乳腺癌CTC为切入点，通过体内外实验，探讨Disulfiram对干细胞干性的抑制和对EMT的逆转作用及其分子机制，明确其对具有上述双表型CTC的靶向抑制作用，及其与化疗药物的协同作用，为制定乳腺癌靶向治疗新策略提供方向。

复发与转移是乳腺癌治疗失败的主要原因。越来越多的证据显示：拥有上皮间质转化（EMT）和癌干细胞（CSCs）双表型的乳腺癌循环肿瘤细胞（CTC）在乳腺癌转移中发挥着重要作用。在侵袭和转移过程中EMT的发生至关重要，而EMT现象的发生常伴随着干细胞/干样细胞（stem-like cells）的产生。因此，具备靶向EMT与CSCs双表型能力的药物将为乳腺癌治疗提供新的突破口。.本课题首先为了更好的明确CTC在乳腺癌中的预后价值，通过检索Medline和ISI Web of Knowledge，对49篇文章所涉及到的6825名乳腺癌患者进行Meta-analysis，我们发现：无论在早期乳腺癌还是在转移性乳腺癌，外周血中CTC的出现均是一个独立的不良预后因素。这一研究结果为推动CTC检测在乳腺癌诊治过程中的临床应用提供了有力证据。.本课题进一步通过体内外实验，重点探讨了临床上已安全使用超过60年的抗酗酒药物Disulfiram在抑制乳腺癌EMT和干细胞潜能方面的作用及相关机制。我们的结果首次发现Disulfiram能抑制TGF-β诱导的EMT：Disulfiram 上调上皮标志物E-cadherin的表达，抑制间质标志物N-cadherin和vimentin的表达，并伴有细胞形态的变化。Disulfiram还抑制与侵袭转移相关的MMP-1和MMP-3的表达，划痕实验和Transwell实验的结果更表明：通过抑制EMT，Disulfiram也相应抑制了乳腺癌细胞的侵袭和迁移能力。球囊形成实验及CSCs标志物的检测进一步表明：Disulfiram在抑制EMT的同时也抑制了肿瘤干样细胞的产生，表现为自我更新能力的减弱、ALDH活性的下降、以及CD44+/CD24-细胞群的减少。我们对Disulfiram抑制乳腺癌EMT和干细胞潜能的作用机制也进行了深入研究。结果表明：Disulfiram能抑制NF-κB的活性，并下调ERK/NF-κB/Snail信号通路，进而发挥抑制EMT和CSCs的作用。本课题的研究结果为“老药新用”—— Disulfiram抗肿瘤治疗的新用途提供了新的理论依据，为从拮抗EMT和CSCs双表型这一角度进行乳腺癌的治疗提供了新思路。