黄芪多糖调节肠道粘膜γδT细胞Toll样受体及相关信号通路的机制研究

黄芪多糖用于肿瘤化疗后患者提高免疫力效果明显。我们以往研究表明：肠道粘膜免疫调节是口服黄芪多糖的主要机理，但具体作用靶点还不清楚。γδT细胞主要分布在粘膜，是连接固有免疫和获得性免疫的桥梁，主要通过Toll样受体参与免疫应答。因此，我们假设：通过Toll样受体及相关信号通路活化γδT细胞是黄芪多糖免疫调节作用的重要机制。本项目采用体外与体内试验相结合，以纯度大于98%的黄芪多糖作为实验药物，以Caco-2细胞模拟肠道吸收，采用抗体阻断、实时定量PCR等方法探索黄芪多糖调节肠粘膜γδT细胞Toll样受体信号通路的作用机理；同时通过构建肿瘤化疗后动物模型，观察黄芪多糖灌服后对机体肠道粘膜γδT细胞的影响，为阐明黄芪多糖调节肠道粘膜免疫提供科学依据，同时为中药多糖免疫药理研究提供新的方法和思路。

黄芪多糖对机体多种免疫细胞具有重要的调节作用。然而，黄芪多糖口服后通过何种途径来作用于机体免疫细胞还不十分明了。肠道黏膜淋巴细胞能够分泌多种免疫相关的因子，促进其它淋巴细胞的生成、增殖，在机体免疫调节中有着举足轻重的地位。γδT细胞在肠道黏膜免疫中起着非常重要的作用，含量高达20-50%。故我们推测黄芪多糖口服后，可能通过调节γδT细胞来影响肠道黏膜的免疫功能继而激发机体免疫系统功能。因此，本课题开展了黄芪多糖对荷瘤小鼠肠道黏膜γδT细胞免疫功能影响的研究，结果如下：.1．体外建立Caco-2细胞单层细胞模型，加入黄芪多糖作用后进行HPLC检测，发现两侧成分存在差异。.2. 体外实验发现：黄芪多糖能够促进健康人外周血γδT细胞及小鼠肠道黏膜γδT细胞增殖，促进其分泌IL-2、IFN-γ及TNF-α，并增强其杀伤功能。其调节作用与TLR4信号通路相关。.3. 建立免疫低下小鼠模型，结果发现：黄芪多糖灌胃治疗能调节免疫低下小鼠肠道上皮内淋巴细胞相关基因的表达。.4. 建立S180荷瘤小鼠模型，结果表明：黄芪多糖能够显著抑制肿瘤的生长。与模型组相比，黄芪多糖作用后荷瘤鼠肠道pp结显著增多，IgA明显升高。同时，黄芪多糖作用后，肠道黏膜γδT细胞分泌TNF-α、IFN-γ显著增多，杀伤活性显著增强。另一方面，与模型组相比，黄芪多糖用药后荷瘤鼠外周血中TNF-α、IFN-γ含量升高，IL-10、 TGF-β含量降低。提示黄芪多糖口服后能作用于肠道黏膜免疫系统，并可能通过促进肠道黏膜γδT细胞免疫功能继而激发机体免疫系统来发挥抗肿瘤作用。.5. 建立S180荷瘤小鼠模型，发现：黄芪多糖能够抑制荷瘤鼠肿瘤的生长，与顺铂联合运用能够达到协同的效果。与顺铂组相比，联合用药组荷瘤鼠脾脏指数和肝脏指数升高，谷丙转氨酶和谷草转氨酶含量降低，提示黄芪多糖对顺铂治疗S180荷瘤鼠能够达到增效减毒的效果。.综上，黄芪多糖能够抑制S180荷瘤鼠肿瘤的生长，其作用机制之一可能是黄芪多糖通过某种方式刺激肠道黏膜γδT细胞，继而激发了机体免疫系统的抗肿瘤功能。此外，黄芪多糖对顺铂治疗S180荷瘤鼠具有增效减毒的作用。.本研究首次探讨了黄芪多糖对肠道黏膜γδT细胞的免疫调节机制，对于其更好的临床应用提供了实验证据。研究期间共发表论文8篇，参加国内外学术交流5次，培养研究生3名，另有2篇英文论文拟投稿。