活血中药对视网膜脉络膜血流及血管平滑肌细胞舒缩影响的分子机制研究

活血中药被广泛应用于治疗视网膜、脉络膜、视神经缺血性疾病，但其改善眼缺血的机理尚未见报告，临床选用药物缺乏循证依据。基于视网膜中央血管系统和睫状血管系统微循环在血管构筑和调节机制方面存在差别，活血中药的作用部位和血液动力学效应存在差异。本课题选取葛根素、川芎嗪为代表采用微球技术检测药物对实验动物（兔）视网膜中央动脉和睫状动脉血液循环的影响；采用Western blotting法检测血管内皮肌细胞内NOS（一氧化氮和酶）、ET-1(内皮素)蛋白的表达的变化；采用原位杂交方法检测血管平滑肌细胞内cAMPmRNA、cGMPmRNA、IP3mRNA表达变化；采用比率荧光成像系统检测细胞内钙离子浓度的变化，以明确药物对视网膜中央动脉系统及睫状动脉系统作用的差异及机制。通过以上研究，我们尝试建立一个甄别活血中药对视网膜、脉络膜血液循环系统作用差异的技术平台，为活血中药在眼科临床的合理应用提供科学依据。

目的：本项目分别从动物实验和体外细胞培养两个方面观察了活血中药（川芎嗪、葛根素）对视网膜脉络膜血流的影响并探讨分子机制。..方法：1. 体外细胞培养方面：培养中视网膜血管内皮细胞和人脉络膜血管内皮细胞，MTT法检测川芎嗪、葛根素对血管内皮细胞增殖的影响，Western blotting检测川芎嗪、葛根素对内皮细胞分泌eNOS和ET-1的影响。..2.动物实验方面：（1）分别以高眼压及急性眼部缺血性动物模型为研究对象，采用彩色微球技术、眼电生理、病理及免疫荧光方法观察川芎嗪、葛根素对正常及高眼压状态下虹膜、睫状体、脉络膜血流的影响。（2）对缺血再灌注视网膜最大反应ERG及ops，视网膜脉络膜组织结构、以及视网膜小动脉血管平滑肌细胞cAMP, cGMP 以及IP3表达的影响。..结果：（1）川芎嗪对正常眼压下家兔虹膜血流有改善作用，但对睫状体、脉络膜的血流无明显影响，对高眼压状态下虹膜、睫状体、脉络膜血流无明显作用。（2）葛根素及川芎嗪对视网膜血管内皮细胞和脉络膜血管内皮细胞均有促增殖作用，并能促进视网膜血管内皮细胞和脉络膜血管内皮细胞的eNOS表达增加，同时下调ET-1的表达，与对照组相比差异有显著性意义（P<0.05）。（3）川芎嗪和葛根素对急性眼部缺血性动物模型恢复灌注后视网膜最大反应ERG波幅无明显改善作用，但川芎嗪组24小时及72小时的视网膜ops值较对照组明显提高，且72小时血管平滑肌细胞的cAMP表达较对照组增强。..结论：川芎嗪能改善视网膜脉络膜循环，其作用机制可能通过上调第一信使eNOS表达，同时下调ET-1的表达；从而促进细胞第二信使血管平滑肌细胞的cAMP表达有关。我们下一步将开展临床研究予以进一步证实。