IL-28B和CD25抗体抑制调节性T细胞增强结核亚单位疫苗免疫活性实验研究

结核亚单位疫苗可以强化卡介苗（BCG）初始的免疫应答，有希望提高成人对结核分枝杆菌的免疫保护能力。然而亚单位疫苗强化免疫中，调节性T细胞（Treg）过强可减弱亚单位疫苗的强化免疫效应。新近的研究表明具有抗病毒作用的细胞因子IL-28B被证实具有增强Th1、活化CD8+T细胞和抑制Treg的作用。前期我们构建了具有较强免疫活性的结核亚单位疫苗Ag85B-MPT64（190-198）-Mtb8.4（AMM），观察到加强免疫次数增多可促使免疫应答向Th2偏移，抗结核免疫保护力在加强免疫2次有所提高，但加强免疫3次反而降低。本课题拟在AMM亚单位疫苗免疫过程中，利用IL-28B抑制Treg增殖；此外，应用Treg高表达的CD25分子的单克隆抗体特异性抑制Treg功能，研究Treg受到抑制后结核亚单位疫苗的免疫学特性改变和对BCG初免基础上AMM强化免疫保护效率的影响，从而研究改进亚单位疫苗的措施。

结核亚单位疫苗免疫，尤其是BCG初免-亚单位疫苗强化免疫过程中，会由于上调调节性T细胞（Treg）而降低Th1型细胞免疫应答，从而减弱机体抗结核免疫保护力。本课题目的是应用IL-28B细胞因子等措施下调调节性T细胞，进而增强Th1型抗结核免疫应答水平和提高疫苗免疫保护力。我们主要开展了以下三方面的研究工作：（1）BCG初免-结核亚单位疫苗强化免疫策略研究。我们的研究表明BCG初始免疫基础上，亚单位疫苗AMM（Ag85B-MPT64（190-198）-Mtb8.4)在第10周和12周强化免疫2次可有效增强机体抗结核免疫保护力，而强化免疫3次反而促进了Th1型免疫应答向Th2型免疫应答转变，Treg增高，保护效率随之降低。（2）细胞因子IL-28B下调调节性T细胞的免疫效应研究。在亚单位疫苗EAMMH（EAST6-Ag85B-MPT64（190-198）-Mtb8.4-HspX）免疫小鼠的同时，注射表达IL-28B的腺病毒，观察疫苗诱导的免疫应答及保护效果的变化。我们观察到IL-28B短期内（4-5周）可有效降低机体调节性T细胞水平，小鼠抗分枝杆菌感染的能力得到增强；但随着时间延长，IL-28B反而明显抑制了Th1型为主的细胞免疫应答，体液免疫水平也有所降低，机体抗结核分枝杆菌免疫保护力不但没有增强，反而略有下降。近期有报道指出体内一定数目Treg对于维持免疫记忆很重要（Nature Communications,2012, FoxP3(+) regulatory CD4 T cells control the generation of functional CD8 memory)。我们认为IL-28B下调调节性T细胞后，激活了大量的效应性T细胞，使得短期抗感染水平增高；同时，疫苗活化的记忆性细胞减少，因而减弱了疫苗诱导的远期保护效果。（3）雷帕霉素辅助疫苗诱导长期免疫记忆效应的研究。在结核亚单位疫苗EAMMH免疫过程中，给予雷帕霉素（Rapamycin）干预。雷帕霉素有效增强了亚单位疫苗诱导的长期（大于20周）免疫记忆，并显著提高了小鼠抗分枝杆菌感染的保护水平（Log10 CFU提高了约0.5，p＜0.01）。结论：结核疫苗免疫需注意避免免疫过强；IL-28B下调Treg下调后，机体短期抗分枝杆菌感染能力增强；雷帕霉素可以增强结核亚单位疫苗诱导的长期免疫记忆。