组蛋白去乙酰化酶抑制剂抗鼻型NK/T细胞淋巴瘤的机制研究

NK/T cell lymphoma (NKTCL) is closely associated with EBV infection. EBV in latent phase escapes from being recognized by immune system, and turns infected cells into cancer cells. It was found that histone deacetylase inhibitors (HDACi) had therapeutic effects on NKTCL in clinical trials. Preliminary study showed that HDACi induced the activation of latent EBV and promoted the apoptosis of infected cells, and the host immune response to EBV was also enhanced. The hypothesis is established that HDACi promotes the expression of EBV protein in NKTCL, inhibits cell proliferation and promotes apoptosis, and enhances the killing effects of T cells on EBV. This project originated in clinical trial of HDACi in the treatment of NKTCL is to investigate effects of EBV on tumor proliferation and immune response, and explore effects of the expression of HDACi activated EBV protein on following aspects: 1) the role of T cell inducing immune response in body; 2) proliferation and apoptosis of tumor cells, and association with therapeutic effects. The purpose of the study is to elucidate the mechanism of HDACi inducing EBV activation and eradicating NKTCL, and pave the way for exploring new treatment methods for the disease.

NK/T 细胞淋巴瘤(NKTCL)与 EB病毒（EBV）感染密切相关，潜伏期EBV逃逸免疫识别，并导致被感染的细胞发生癌变。临床研究发现组蛋白去乙酰化酶抑制剂（HDACi）具有抗NKTCL的作用，我们前期研究发现HDACi可以诱导潜伏EBV的活化进而促进感染细胞凋亡，同时宿主针对EBV的免疫反应也得到了增强。因此提出假设：HDACi促进NKTCL内EBV蛋白表达，抑制细胞增殖促进凋亡，增强T细胞对携带EBV病毒细胞的杀伤作用。本项目以参与HDACi治疗NKTCL淋巴瘤临床试验为契机，观察治疗过程中EBV病毒学、肿瘤细胞生长和免疫反应的变化，探索HDACi活化EBV蛋白表达后：（1）在诱导机体T细胞免疫反应中的作用；（2）对肿瘤细胞增殖和凋亡的影响、相关分子机制及与疗效间的关系。明确HDACi诱导NKTCL内EBV活化及清除肿瘤的相关机制，为探索新型治疗方法提供科学依据。

NK/T 细胞淋巴瘤(NKTCL)与 EB病毒（EBV）感染密切相关，目前认为在EB病毒（EBV）感染基础上，出现多种遗传学异常共同促进了肿瘤的形成。目前已发现的遗传学异常主要包括染色体异常、重现性基因突变、表观遗传学异常、基因过度表达及分子标记物异常，其中突变频率最高的基因为表观遗传修饰基因、肿瘤JAK-STAT信号通路基因、抑癌基因和RNA解螺旋酶基因DDX3X。临床研究发现组蛋白去乙酰化酶抑制剂（HDACi）具有抗NKTCL的作用，但单药治疗效果不佳。我们从已知的基因突变及异常活化的信号通路着手，探索HDACi联合不同药物对NKTCL的抗肿瘤作用，并深入分析具体机制。本项目第一部分内容：先运用RNA-Seq技术整体检测HDACi对NKTCL基因及信号通路表达的影响，然后采用western blot、流式细胞检测技术、慢病毒转染技术、shRNA技术等方法探究HDACi对JAK/STAT通路的作用机制，进而探究HDACi与JAK3抑制剂联合使用对NKTCL作用效果及机制，最后构建NKTCL小鼠模型，从体内水平验证HDACi单药及联合用药的作用效果。研究结果显示HDACi可通过抑制JAK/STAT通路发挥抗NKTCL的作用，与JAK3抑制剂联合使用可增强抗NKTCL的效果。第二部分内容：先检测HDACi单药、DNA甲基转移酶抑制剂（DNMTi）单药及两药联合对肿瘤细胞增殖、凋亡、细胞周期等的影响，采用RNA-Seq技术检测两药联合对NKTCL常见突变基因及信号通路表达的影响，然后分别干扰、过表达DDX3X基因探讨该基因在两药联合抗肿瘤中的作用，最后构建NKTCL小鼠模型，从体内水平验证HDACi联合DNMTi的抗肿瘤作用。研究结果显示HDACi联合DNMTi对NKTCL具有协同抗肿瘤作用，抑制DDX3X基因表达可增强两药联合的效果。该研究结果对HDACi联合用药提供了理论依据，并对指导患者个体化治疗意义重大。