抗骨形成蛋白基因工程抗体的研究

提取bBMP-AcAb杂交瘤细胞总RNA反转录成cDNA，设计合成寡核苷酸引物，PCR扩增轻（VL）重（VH）链可变区基因片段分别抗隆入puc18.19载体中，并以重组puc18.19测定VL、VH基因序列，结果表明VH基因隶属小鼠lgG2BVH与JH4重排，与小鼠IgGHALA同源性最高为82%。VL基因隶属小鼠IgGkappa链第IV组，与小鼠IgGKMAPQ同源性最高，VH、VL均为新的基因序列内无终止码。设计合成了含15个氨基酸的连按肽并克隆入PUC19质粒中，通过限制性酶切位点，将VH的C端与VL的N端连接，构建成puc19-bBMPSCFV重组质粒。将bBMPscFV克隆入pGEX-4T-1融合表达载体，经IPTG诱导，在大肠杆菌JM109中获得表达，产物质量约52KD，与予期结果相符。初步纯化产物并用免疫组化染色和酸联免疫吸附测定，该抗体与bBMP有结合活性。