黄芩有效成分对鱼类细胞肿大虹彩病毒的作用机制研究

本项目拟以业已建立且对鱼类细胞肿大虹彩病毒具有高敏感性的海水鱼类组织细胞系为体外研究体系，结合透射电镜、免疫荧光、荧光定量PCR、ELISA等多种细胞分子生物学研究手段，进行中草药黄芩各有效成分对鱼类细胞肿大虹彩病毒的作用机制研究，探索黄芩有效成分对病毒的总体抑制作用及对病毒在细胞中吸附、穿入、脱衣壳、核酸和蛋白质的生物合成等过程的抑制作用，确定黄芩有效抗病毒成分对病毒的作用靶点与作用机制，这对探索黄芩有效成分的抗病毒机理，发现新的药物作用靶点提供了依据，对水产养殖病害防治中有效抗病毒药物或免疫增强剂的研制及开发具有重要的意义。

本项目分离获取鱼类细胞肿大虹彩病毒，利用新建立的且对病毒具有高敏感性的重要海水养殖鱼类细胞系建立病毒的体外细胞研究体系，选择黄芩四种主要有效成分黄芩苷、黄芩素、汉黄芩苷、汉黄芩素，筛选出能够抑制细胞肿大虹彩病毒且不影响宿主细胞功能的有效成分，并结合MTT、光镜观察、电镜观察、荧光定量PCR、病毒铺覆蛋白印迹技术（VOPBA）等多种细胞分子生物学手段进一步研究了其抗病毒机理。实验结果显示，四种黄芩有效成分在“病毒感染后”及“病毒与药物同时加入”的实验中，不能表现出明显的对病毒抑制作用，而在病毒感染前，10ug/mL黄芩苷可有效抑制病毒对细胞的侵染，流式细胞仪检测转染入细胞的绿色荧光蛋白（GFP）同样证明了此结论。进一步透射电镜分析结果推测黄芩苷通过某种机制，阻止病毒与细胞表面受体结合，达到对细胞肿大虹彩病毒的抑制作用。通过筛选多种处理方式，由VOPBA法初步得到病毒侵染细胞的结合蛋白，并对病毒侵染机理进行了初步分析。本项目取得的进展对于建立中草药抗病毒体系有重要的作用，这对探索黄芩有效成分的抗病毒机理，发现新的药物作用靶点提供了依据，对水产养殖病害防治中多种有效抗病毒药物或免疫增强剂的研制及开发具有重要的意义。