C/EBP磷酸化修饰对LPS诱导的人支气管上皮细胞膜磷脂修复的调控

Acute lung injury or acute respiratory distress syndrome (ALI / ARDS) is a lethal clinical syndrome with high morbidity and mortality. There are no effective treatment measures. LPS is one of the most important risk factors. In essence,it is a kind of excessive, uncontrolled inflammatory reactions of lung which damage the barrier function of alveoli - pulmonary capillaries - bronchioles extensively , and increase the permeability of vascular membrane. Destruction of membrane phospholipids is the beginning of the injury. Phospholipase A2(PLA2) is a key enzyme with hydrolysis of membrane phospholipids. While the clara cell secretory protein (CCSP) is an endogenous PLA2 inhibitors. We intend to confirm the interaction between the transcription factor-C/EBP and PLA2/CCSP and preliminarily determine the binding site with co-immunoprecipitation. To observe the regulation of PLA2 and CCSP trend through phosphorylation / dephosphorylation of C/EBP, combined with the membrane phospholipid structure, function, and the membrane hydrolyzate. To further clarify the C/EBP as the key role of this molecular switch .To find out the signal transduction pathway in the regulation of membrane phospholipid damage and repair. To provide reliable experimental and theoretical basis for clinical treatment of lung injury.

急性肺损伤/急性呼吸窘迫综合征(ALI/ARDS)是一种常见的灾难性临床综合征，发病率和死亡率高，目前尚无有效的治疗措施。内毒素是最首要的致病因素，其本质是一种肺内过度性、失控性的炎症反应使肺泡-肺毛细血管-细支气管屏障功能广泛受损，膜通透性增高的血管渗漏综合征。膜磷脂的破坏是肺泡和支气管上皮屏障损伤的开始。磷脂酶A2是水解膜磷脂的关键酶，而clara细胞分泌蛋白（CCSP）是内源性PLA2抑制剂，本项目拟采用免疫共沉淀明确转录因子C/EBP与BEAS-2B细胞中的PLA2和CCSP具有相互作用，并初步确定C/EBP分别与PLA2和CCSP的结合区域；通过磷酸化/去磷酸化修饰C/EBP，观察其对PLA2和CCSP的调控趋势，结合膜磷脂结构、功能及膜水解产物的观察，明确C/EBP作为分子开关的关键作用，寻找调控膜磷脂损伤与修复的信号转导通路，为临床治疗肺损伤的新靶点提供可靠的实验和理论依据。

急性肺损伤/急性呼吸窘迫综合症（ALI/ARDS）是临床上常见的危重急症，ALI的本质是各种损伤因素导致机体过度炎症反应使肺泡细胞膜的完整性受到损伤。PLA2是一类广泛存在于细胞膜的磷脂水解酶，能催化甘油磷脂上二位（sn-2）不饱和酰酯键水解，生成溶血卵磷脂、血小板活化因子（PAF）和花生四烯酸（AA），PLA2水解破坏膜磷脂是导致肺损伤发生的关键环节。CCSP作为内源性PLA2抑制剂可以增强细胞膜磷脂的自身防御能力。但在ALI的发生机制中，CCSP受何种因素的调控，目前并不明确。[目的]本研究通过建立LPS诱导急性肺损伤的体外模型，探讨损伤模型中CCSP及PLA2的调控机制，寻找LPS体外诱导的上皮细胞膜损伤后修复的主要途径。[方法] [结果]通过本研究我们证实C/EBPβ/CCSP/PLA2调控通路对LPS诱导的人支气管上皮细胞膜磷脂损伤修复具有重要的作用。C/EBPβ通过转录调控影响CCSP基因的表达，进而对PLA2直接导致的细胞膜损伤表现出抑制损伤及修复的作用。同时，我们证实核转录因子C/EBPβ的磷酸化可以影响CCSP的转录活性，阻止C/EBPβ/CCSP/PLA2调控通路的激活，从而抑制LPS诱导引起的上皮细胞膜损伤，细胞磷脂膜损伤判断数据主要来自于两个重要指标：血小板活化因子（PAF）和花生四烯酸（AA）的含量变化。[结论] C/EBPβ/CCSP/PLA2调控通路对LPS诱导的人支气管上皮细胞膜磷脂损伤修复具有重要的调控作用，因此本研究对于急性肺损伤/急性呼吸窘迫综合症（ALI/ARDS）的临床治疗具有重要的意义。