TLR4信号转导通路介导云芝糖肽免疫调节的机制研究

Clinical conventional treatment of malignant tumors has its obvious limitations currently, so Traditional Chinese Medicine(TCM) with the function of immunomodulatory anti-tumor has been widely used by clinical physicians. The mechanism of TCM is unclear, therefore the application is limited in some regions, especially in western countries. Our pre-basic and clinical studies have shown that polysaccharopeptide (PSP) has immunomodulatory anti-tumor effects and its mechanism may be involved in the TLR signaling pathways, so we believe that it is mediated by the TLR4 signal pathway. In our study, advanced experimental techniques such as gene chips, quantitative PCR, western blot and signal blockers will be used in T lymphocytes culture models in normal person and breast cancer patients, genetic defects EAC tumor-bearing mice will be used to further verify the mechanism of PSP on TLR4 signal pathway. The results will reveal the immunomodulatory anti-tumor mechanisms of PSP, provide a theoretical basis for the structural modification and targeted therapy of PSP and the development of a novel immunomodulatory anti-tumor TCM, and also provide new ideas for the modernization of TCM.

目前临床上针对恶性肿瘤所采用的常规治疗手段都有其明显的局限性，具有免疫调节抗肿瘤作用的中药在临床上被广泛应用，由于绝大多数中药调节免疫的深入机制尚不清楚，因而，在一些地区特别是西方国家的应用受到限制。在我们的前期研究显示云芝糖肽(PSP)具有免疫调节抗肿瘤作用，其机制可能涉及TLR信号通路的基础上，我们认为TLR4信号通路介导了PSP免疫调节抗肿瘤作用的机制。在本研究中，拟在正常人和乳腺癌患者T淋巴细胞培养模型，应用基因芯片、定量PCR、Western blot和阻断剂等先进实验技术，对PSP免疫调节抗肿瘤、调控TLR4信号通路进行研究，并利用基因缺陷EAC荷瘤小鼠加以验证。研究结果将为全面揭示PSP免疫调节抗肿瘤机制、PSP的结构修饰及靶向治疗，以及新型免疫抗肿瘤中药方剂的研制提供理论依据，也为中药现代化研究提供新的思路。

恶性肿瘤是我国主要的疾病死亡原因。目前肿瘤患者主要采取化疗为主或者手术切除/放射治疗后配合化疗的方法。但是现有化疗药物的靶向性有限，对机体正常免疫系统的造成伤害。机体免疫系统经过化疗药物的杀伤，效能弱化造成肿瘤细胞免疫逃逸，继续扩散或感染。免疫调节类中药具有促进放化疗后机体免疫机能的恢复，延长肿瘤患者的生存期，提高生存质量等多种生物学活性，在肿瘤辅助放化疗被广泛应用，但其具体的药效机理尚不清楚。云芝糖肽（PSP）作为免疫调节剂及免疫抗肿瘤药物被广泛应用。中药多糖的免疫调节作用是通过Toll 样受体 (TLR)信号通路来实现的。而TLR4信号通路相关研究表明其调控白细胞的终端效应因子与PSP类似，有IL-2、TNF、IFN等。因此我们认为，TLR途径中由TLR4受体激活的TRAM-TRIF-TRAF6途径可能是PSP免疫调节信号转导的关键通路之一，并在本研究中证实了该假设。本研究获得以下结果：（1）成功建立体外培养乳腺癌患者外周血单个核细胞模型，发现PSP对Th1/Th2类细胞因子的分泌有显著调节作用；（2）在外周血单个核细胞模型中，发现PSP对TLR4信号转导途径关键节点基因和蛋白的表达水平有影响。（3）在外周血单个核细胞模型中，发现TLR4通路相关节点阻断剂抑制PSP对Th1/Th2类细胞因子分泌的促进作用；（4）在体外细胞模型中，发现PSP对第二信使也有调节作用；（5）在EAC荷瘤小鼠模型中，发现PSP对荷瘤小鼠外周血中细胞因子的分泌有调节作用；（6）在荷瘤小鼠模型中，发现PSP对TLR4信号转导途径关键节点基因和蛋白的表达水平有影响；（7）在基因缺陷荷瘤小鼠中，验证了调控TLR4 信号通路为PSP免疫调节抗肿瘤的机制。结论：TLR4-MyD88依赖途径可能是PSP发挥免疫调节作用的信号通路之一。.在本项目的资助下，已发表论文8篇，其中SCI文章5篇，CSCD核心库论著3篇。在此期间，培养研究生5名，使研究人员具备更好的实验技能和科研思维。本项目的研究成果，揭示PSP免疫调节抗肿瘤机制，为免疫类中药机理的探讨提供研究思路及技术平台，达到预期目标。