GnRH-A调节羊卵巢和卵泡发育的机制及超排效果研究

本课题旨在：（1）在发情期母绵羊注射不同剂量的GnRH激动剂（阿拉瑞林），通过测定血清FSH、LH、GnRH和E2浓度变化分析垂体促性腺激素细胞合成与释放主要生殖激素的能力，揭示GnRH-A对动物生殖内分泌调控中的作用。（2）光学显微镜和电子显微镜观察卵巢和卵泡的显微和超微结构变化，用Motic图像处理软件测定卵巢和卵泡的大小和发育状况，用超声诊断仪检测卵泡发育和排卵效果。（3）测定和克隆绵羊GnRHR、LHR和FSHR的基因序列，用表达谱芯片技术分析卵巢和垂体中GnRHR mRNA、FSHR mRNA 和LHR mRNA等相关基因的表达，用免疫组织化学方法和酵母双杂交技术确定垂体促性腺激素细胞和卵细胞膜上GnRH-ago与GnRHR 、LH与LHR和FSH与FSHR的结合位点及方式。（4）系统研究GnRH-A调节母羊卵巢和卵泡发育的分子机制及超排效果，为调控和提高动物繁殖能力提供依据。

项目立项后课题组成员按照分工和年度计划积极进行项目的实施，目前已经圆满完成了各项任务。取得了如下主要成果：.（1）制备了GnRH-A抗原，为乳白色均匀悬液，物理化学性状稳定良好，安全可靠，无任何不良反应；以50μg/ml、100μg/ml、150μg/ml剂量的抗原乳剂分别对3个实验组动物进行免疫接种，各组动物均在免疫后两周内检测到GnRH-A抗体，并第4周左右达到高峰， ELISA效价分别为1：800、 1：1600和1：1600，说明100μg/ml、150μg/ml剂量的抗原产生的抗体效价致相同，故推荐使用100μg/ml的剂量。.(2) A、B组体重从0d-7d下降（P<0.05）至14d体重达到最低值（P<0.01）, D、C组体重从0d-7d体重缓慢增加，各组小鼠体重在7d-14d维持在一个水平，14d-21d体重又缓慢增长。A、B和C组两侧子宫重均极显著低于D组（P<0.01），而B组和C组又低于A组（P<0.05）；实验组的肝脏均大于对照组；C组的脾脏明显大于其他三组（P<0.05）而A组和B组均大于对照组；各脏器指数和脏器重相似。组间无显著差异（P＞0.05）。.（3）阿拉瑞林首次免疫7d后，各实验组的抗体浓度逐渐升高，EG-Ⅰ、EG-Ⅱ和EG-Ⅲ分别在28d、28d和35d达到峰值（P＜0.05）, EG-IV和EG-V则在在45d达到峰值（P＜0.01）,至60d时仍明显高于对照组（P＜0.05）。14d-60d间EG-IV和EG-V抗体浓度均高于EG-Ⅰ、EG-Ⅱ和EG-Ⅲ（P＜0.05）。各组的体重随着试验的进行逐渐增加，以EG-V和EG-III最明显，至70d时大于其它组；日增重也以EG-V和EG-III为最大，EG-V和EG-IIIde 日增重于35d显著大于CG。 .(4)阿拉瑞林免疫7d后，各实验组的抗体浓度逐渐升高，EG-Ⅰ、EG-Ⅱ和EG-Ⅲ分别在28d、28d和35d达到峰值（P＜0.05）, EG-IV和EG-V则在在45d达到峰值（P＜0.01）,至60d时仍明显高于对照组（P＜0.05）。14d-60d间EG-IV和EG-V抗体浓度均高于EG-Ⅰ、EG-Ⅱ和EG-Ⅲ（P＜0.05）。EG-Ⅰ、EG-Ⅱ的GnRH在21d和28d抵谷值（P＜0.05），EG-Ⅲ、EG-Ⅳ和EG-Ⅴ则在45d抵谷值（P＜0.01）,