眼镜蛇毒金属蛋白酶激活和损伤血管内皮细胞的作用及机制

蛇毒金属蛋白酶是蛇毒的重要功能蛋白，具有多样的生物学活性，有潜在重要的临床应用前景。本申请项目前期工作从中华眼镜蛇毒中纯化出一个新的PIII型金属蛋白酶Atrase B。相关研究表明，Atrase B通过酶切补体特定分子抑制补体溶血活性。Atrase B与正常人血清补体孵育后可诱导人血管内皮细胞瞬时显著释放P-selectin。其激活内皮细胞的信号分子不同于目前任何已知的补体活化产物。围绕此重要线索，本项目拟开展Atrase B激活和损伤内皮细胞的作用及机制研究。通过开展Atrase B与正常人血清补体孵育激活和损伤内皮细胞的作用研究，评价内皮细胞功能指标的变化情况，鉴定和阐明该信号分子及可能的信号通路相关性，探讨目标蛋白在眼镜蛇毒中的生物学功能，获得对相关科学问题的认识，促进对眼镜蛇毒金属蛋白酶结构与功能的认识，为其可能的临床应用提供科学依据和物质基础，为蛇伤防治提供有价值的思路和参考。

蛇毒金属蛋白酶是蛇毒中重要的功能蛋白，具有多样的生物活性，有潜在重要的临床应用。本项目开展了眼镜蛇毒PIII型金属蛋白酶Atrase B激活和损伤内皮细胞的作用及机制的研究。结果表明，Atrase B通过酶切血清补体可激活血管内皮细胞，导致内皮细胞出现活化和损伤。Atrase B与正常人血清补体孵育后可诱导血管内皮细胞瞬时显著释放P-selectin和vWF，进而使E-selectin、ICAM-1、MCP-1、t-PA、PAI-1上调表达，而IL-8没有明显变化。同时，内皮细胞合成释放NO明显下降，内皮细胞活力受到一定抑制，caspase 8的活化信号有所上调。Atrase B和正常人血清补体的孵育物所导致的内皮细胞活化与JAK2通路、NF-κB通路活化有关，与p38 MAPK无关。而Atrase B酶切补体C6和B因子所产生的片段可能是诱导上述效应的主要信号分子。本研究进一步揭示了目标蛋白的生物学功能，加深了对眼镜蛇毒金属蛋白酶结构与功能的认识，拓展了对相关科学问题的认识，能为蛇伤防治提供有价值的思路和参考。 通过项目实施，发表论文7篇，其中核心期刊6篇；在全国性专业学术会议上进行了2个专题报告的交流，并在西南地区会议上作了大会报告交流；培养研究生2名。项目取得了良好的实施效果。