P2X7受体在少突胶质前体细胞缺氧缺血性损伤中作用的研究

少突胶质前体细胞（OPCs）对缺氧缺血（HI）高度易损，HI后OPCs死亡及分化障碍是早产儿脑白质病变形成的关键，但OPCs缺氧缺血性损伤机制尚未阐明。P2X7受体（P2X7R）广泛参与神经胶质病理过程，并调节胶质细胞增殖分化。新近我们发现OPCs表达功能性P2X7R，激活P2X7R使得钙离子内流并参与OPCs损害。为进一步了解P2X7R在OPCs缺氧缺血性损伤中的作用，本项目采用细胞培养、基因转染、膜片钳等技术，建立离体、在体OPCs正常和HI模型，观察HI条件下OPCsP2X7R表达、功能特性的改变；通过上调、下调P2X7R表达及给予P2X7R激动剂、拮抗剂干预，观察P2X7R对缺氧缺血模型的OPCs存活、增殖分化和髓鞘生成比例的不同调节和保护作用。以期对P2X7R在OPCs缺氧缺血性损伤中的作用及机制提供资料，为缺氧缺血性脑白质损伤治疗提供线索。

本研究在建立离体培养OPCs、P3大鼠缺氧缺血性脑损伤模型基础上，应用免疫组化，western-blot，real-time PCR，电镜以及行为学检测等方法，观察P2X7受体在少突胶质细胞的表达，并探讨了P2X7受体在缺氧缺血性脑损伤中的作用。.在离体实验中，从基因和蛋白水平证明OPCs表达P2X7受体，激活P2X7受体能介导阳离子内流、质膜孔道形成，造成OPCs死亡，这些效应均能被纳摩尔水平的P2X7受体特异性拮抗剂BBG抑制；缺氧缺血2小时，ATP释放量明显增加，OPCs[Ca2+]i升高，质膜孔道形成，2小时后，约40%OPCs死亡， BBG(100nM)预处理起到部分保护作用；缺氧缺血后P2X7受体表达下调。在体实验发现，在正常大鼠，约65 ± 3.2%NG2+OPCs表达P2X7受体；缺氧缺血后4d（P7），NG2+细胞数量明显减少，NG2+/P2X7R+细胞比例降至39 ± 4.7%；患侧脑组织P2X7受体表达下调，以白质更为明显；随缺氧缺血后日龄增加，P2X7受体表达有所恢复，但仍低于假手术组，NG2表达逐渐接近假手术组水平，O4表达高于假手术组，而MBP表达明显低于假手术组；电镜显示缺氧缺血后25天（P28），髓鞘结构松散。P2X7受体拮抗剂BBG可部分逆转上述效应，行为学检测明显改善。本研究证明P2X7R与OPCs缺氧缺血性损害密切相关。缺氧缺血后早期NG2+/P2X7R+大量死亡可解释P2X7R的下调，而NG2+/P2X7R-细胞对缺氧缺血耐受性更强。此外，P2X7R还可能参与损伤后少突胶质细胞异常分化和成熟障碍。针对P2X7R的干预，有望成为治疗新生儿缺氧缺血性脑损伤的有效手段。本项目发表国内核心期刊论著 1 篇，英文论文正在撰写中。尚未完成课题申请书预定的目标要求，将在后续时间中完成。