利用酵母双杂交系统筛选β－内酰胺酶抑制剂

建立了酵母双杂交系统和筛选方法；将来自于质料pBR322上的β-内酰胺酶（抗氨苄青霉素）基因克隆于载体质粒pGBT9（2+）上构建了“诱饵”质粒；设计了一个编码八个氨基酸的随机寡核苷酸序列，用PCR方法以合适的条件将其扩增，并转化大肠杆菌构建了一个编码八肽的随机DNA序列库；经过初筛、复筛该随机DNA序列库中获得一段编码具有体内与β-内酰胺酶发生交互作用的多肽序列；将编码该八肽序列的DNA克隆于载体质粒pGEX-4T-1并成功表达；在我们设计的一个检测β-内酰胺酶活性抑制作用的系统中（β-酰胺酶粗提液、氨苄青霉素、大肠杆菌敏感株和八肽精制品共培养），表达的八肽粗制品显示对β-内酰胺酶活性有一定的抑制作用。