基于脑微血管内皮保护的清脑益智方治疗血管性痴呆的作用机制研究

The main pathological features of vascular dementia (VaD) are cerebral vascular diseases and cognitive impairment, and cerebral vascular endothelial dysfunction is one of the important aspects of its pathology. The clinical treatment for VaD focuses on neuroprotection and vascular protection, and the neurons, brain microvascular endothelial cells (BMEC), etc. were considered as a whole neurovascular unit (NVU). Previous studies have showed that QingnaoYizhi formula (QNYZF) can protect neurons and improve cognitive function in patients with VaD. But whether it can anti-neuron injury by protecting BMEC has not been studied. We will establish the VaD model of old rats in this study, and cognitive function, cerebral blood flow and neurons in rats will be detected respectively with the eight-arm maze and cerebral blood flow monitor. Then, hypoxia injury model of BMEC will be used to research the endothelial protective mechanism of serum containing QNYZF through PI3K/Akt/eNOS/NO pathway; Meanwhile, study of BMEC conditioned medium containing QNYZF on anoxia-injured neurons by BDNF/TrkB/PI3K/Akt pathway will be done to clarify the mechanism of QNYZF on protecting BMEC to anti-neuron injury. This study aims to provide a scientific basis for the treatment of VaD.

血管性痴呆（VaD）的主要病理特征为脑血管病变和认知功能障碍，脑微血管内皮功能障碍是导致脑血管损伤、影响认知功能的重要病理环节之一。临床治疗VaD也注重血管和神经保护，将神经元、脑微血管内皮细胞（BMEC）等合称为神经血管单元（NVU）。前期研究表明清脑益智方（QNYZF）能保护神经元而改善VaD患者的认知功能，但它是否可通过保护BMEC而抗神经元损伤，尚未进行研究。本项目拟建立老年大鼠VaD模型，采用八臂迷宫、脑血流监测仪考察QNYZF对大鼠认知功能、脑血流量和神经元的作用；建立BMEC缺氧损伤模型，围绕PI3K/Akt/eNOS/NO途径研究QNYZF含药血清保护BMEC的机制；结合NVU研究思路，围绕BDNF/TrkB/PI3K/Akt途径考察BMEC含QNYZF培养基对神经元缺氧损伤模型的影响，以阐明QNYZF通过保护BMEC而抗神经元损伤的作用机制，为其临床治疗VaD提供科学依据

传统医学将血管性痴呆（VaD）归为”呆症”“善忘”、“愚痴”等范畴。张伯礼院士将VaD 的发病机理总结为气虚阴亏，痰饮内生，瘀血阻络，痰瘀互结，郁久化热，痰瘀火毒相互为患，形成恶性循环，败坏脑络，殃及脑髓，阻闭清窍，蒙蔽神明。据此，他结合数十年治疗VaD的临床经验，提出了以补气养阴、清热解毒为主的治法，选用人参、丹参、黄连、麦冬、莲子心、浙贝母、石菖蒲、冰片组成清脑益智方（QNYZF）。临床研究表明，QNYZF可有效改善VaD患者认知功能和日常生活社交能力，还可调节脑血流状态和血液流变性；实验研究表明，该方可抑制神经元中乳酸脱氢酶及丙二醛分泌，增强超氧化物歧化酶活性，促进神经生长因子、白介素-6表达，抑制神经元凋亡，并促进其修复与突触重塑等，直接保护神经元。但对其是否可通过保护脑微血管内皮细胞（BMEC）而间接保护神经元尚未进行研究。本项目建立了大鼠VaD模型，考察QNYZF对大鼠认知功能、脑血流量的作用；建立大鼠脑微血管内皮细胞（rBMEC）缺氧损伤模型，围绕PI3K/Akt/eNOS/NO途径研究QNYZF含药血清保护rBMEC的机制；结合神经血管单元研究思路，围绕BDNF/TrkB/PI3K/Akt途径考察rBMEC含QNYZF培养基对神经元缺氧损伤模型的影响，以阐明QNYZF通过保护BMEC而抗神经元损伤的作用机制。研究结果表明，QNYZF可有效改善VaD大鼠认知功能和脑血流量，降低血清中ET-1含量，并促进BDNF基因及蛋白表达，提高Bcl-2/Bax比值，保护神经元；QNYZF含药血清可增加脑微血管内皮细胞中NO释放量，降低ET-1含量，促进BDNF、eNOS蛋白和eNOS、Akt基因表达，以及Akt磷酸化，通过PI3K/Akt/eNOS/NO途径保护BMEC；其条件培养基可以改善神经元细胞形态，抑制其凋亡，并促进细胞内BDNF、TrkB、PTEN基因及蛋白表达和Akt磷酸化，通过BDNF/TrkB/PI3K/Akt途径保护神经元，表明QNYZF可通过保护BMEC而间接保护神经元，为其的临床应用提供了科学依据。发表学术论文6篇，其中SCI收录1篇，培养硕士研究生1名。