硇洲岛潮汐带无脊椎动物相关原核生物多样性研究

应用纯培养法(cultivation method)、免培养法(culture-independent method)和基于16S rRNA基因序列的系统发育分析研究湛江硇洲岛潮汐带部分优势无脊椎动物相关原核生物多样性，分析其中的细菌（含放线菌）、古菌的系统发肓关系（phylogeny）和分布规律；并根据免培养分析结果对部分系统发育地位独特的未培养微生物（as-yet uncultured microorganism）进行分离策略探索；利用多相分类方法（polyphasic taxonomic approach）对分离菌株中的潜在新类群（potential new taxa）进行分类学研究。可以系统全面地认识该类微生物资源的基本状况，建立一套分离未培养微生物的方法，分离和保藏一批代表性菌株，为进一步研究、保护和开发利用该类微生物资源奠定基础，并为研究进化与适应机理提供实验依据和模式菌株。

研究表明，南海各类环境中蕴藏着丰富的耐盐和嗜盐微生物资源。硇洲岛位于湛江市以东的南海北部雷州湾，是一个研究南海岛屿微生物多样性的理想场所。本课题应用纯培养法、免培养法和基于16S rRNA基因序列的系统发育分析研究硇洲岛潮汐带部分优势无脊椎动物相关原核生物多样性，对分离菌株进行抗菌活性筛选，并对代表潜在新类群的菌株进行分类学研究。较全面系统地认识了硇洲岛潮汐带优势无脊椎动物相关原核生物多样性的基本状况和分布规律，建立了该类微生物资源的有效分离方法，确定了部分新类群代表性菌株的分类地位，为进一步研究、保护和开发利用该类微生物资源奠定了基础。.从4种硇洲岛潮汐带优势无脊椎动物（海葵、海胆、牡蛎、栉江珧）分离得到702株原核生物，通过形态观察和部分生理生化实验去冗余，选取240个代表性菌株进行基于16S rRNA基因序列的系统发育多样性分析。结果表明，这240个代表性菌株可以归为58个物种，属于5个大的系统发育类群、21科、37属。大多数菌株与其系统发育关系最密切的已知物种的典型菌株之间存在一定的遗传差异，且至少有23株可能代表新的分类单元（potential new taxa）。.采用免培养法对海葵相关原核生物多样性进行了研究。随机挑取的300个16S rRNA基因克隆经PCR-ARDRA分析可以分为85个OTUs；基于16S rRNA基因序列的系统发育分析结果表明这些OTUs分属于细菌域的6个大的系统发育类群、15个科、27个属。其中Proteobacteria门为优势类群（43.1％），其次为Firmicutes门（26.2％）和Actinobacteria门（15.4％）。.运用多相分类方法对部分潜在新类群代表性菌株进行了分类学研究，结果表明其中17菌株分别代表了17个新物种，同时对海滨芽孢杆菌属（Pontibacillus）和泡菜球菌属（Jeotgalicoccus）进行了修订描述，相关论文已经在IJSEM等分类学期刊有效发表（Valid publication）。.对分离自海葵、海胆和栉江珧的600个分离菌株进行了抗菌活性筛选，共筛选到134株抗菌活性阳性菌株，阳性率22.3%，其中25株具有较强的广谱抗菌活性。.综上研究结果表明，硇洲岛潮汐带无脊椎动物中存在较丰富的细菌多样性，并且其中蕴藏着较多的新类群和具有开发抗菌活性物质潜力的产生菌资源。